Page 58 - 《中国药房》2024年2期
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CONCLUSIONS GW501516 can relieve the hypoxia-induced injury of PAECs via the inhibition of oxidative stress， the mechanism
          of which may be associated with activating Nrf2.
          KEYWORDS     GW501516；  hypoxia；  pulmonary  artery  endothelial  cells；  oxidative  stress；  injury；  nuclear  factor  erythroid  2-
          related factor 2


              低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hyperten‐            1.2 主要药品与试剂
          sion，HPH）是低氧所致的肺动脉高压，属于肺动脉高压                            GW501516（批号 SML1491）、二甲基亚砜（dimethyl
          的第三大类。持续的低氧可引起肺血管重构，进而导致                            sulfoxide，DMSO）（批号 D2625）、抗氧化剂 N-乙酰半胱
          HPH，长期过高的肺动脉压力会诱发患者出现难以控制                           氨酸（N-acetylcysteine，NAC）（批号A0150000）均购自美
          的右心衰竭而死亡。肺动脉内皮细胞（pulmonary artery                   国 Sigma-Aldrich 公司，纯度均≥98%；核因子 E2 相关因
          endothelial cells，PAECs）在低氧肺血管重构中起至关重               子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）激活
          要的作用，一旦 PAECs 发生损伤，肺血管重构过程即同                        剂 富 马 酸 二 甲 酯（dimethyl  fumarate，DMF）（批 号
          步启动，表现为血管收缩与舒张功能紊乱、肺动脉平滑                            S2586）、Nrf2 抑制剂 ML385（批号 S8790）均购自美国
          肌细胞异常迁移与增殖、细胞外基质合成增加，最终导                            Selleck 生物科技有限公司，纯度均≥99%；CCK-8 试剂
                      [1]
          致肺动脉高压 。此外低氧还可诱导PAECs产生氧化应                          盒购自日本同仁化学研究所；Annexin Ⅴ-FITC/PI 凋亡
                                                     [1]
          激，进而损伤PAECs，导致低氧肺血管重构和HPH 。因
                                                              检测试剂盒（批号 556547）购自美国 BD 公司；乳酸脱氢
          此，具有逆转低氧致 PAECs 损伤作用的药物，可能会改
                                                              酶（lactate dehydrogenase，LDH）（批号 C0017）、ROS（批
          善低氧肺血管重构。
                                                              号 S0033S）、超 氧 化 物 歧 化 酶（superoxide  dismutase，
              过 氧 化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受 体（peroxisome
                                                              SOD）（批号 S0101S）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione
          proliferator-activated receptors，PPARs）是一种核受体，在
                                                              peroxidase，GPx）（批号 S0058）、过氧化氢酶（catalase，
          配体激活时充当转录因子促进细胞转录，包含 PPARα、
                                                              CAT）（批号S0051）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）（批
          PPARγ和PPARδ 3种亚型。既往研究发现，PPARδ具有
                                                              号 S0131S）检测试剂盒、BCA 试剂盒（批号 P0012S）、细
          抑制炎症反应、抗氧化应激、改善内皮细胞功能、抗动脉
                                                              胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒（批号P0028）均购自
                          [2]
          粥 样 硬 化 等 作 用 。 GW501516 是 一 种 人 工 合 成 的
                                                              上海碧云天生物技术有限公司 ；兔源 PPARδ（批号
          PPARδ 激动剂，已被用于治疗肥胖症、脂质紊乱和心血
                                                              74076）、Nrf2（批号 12721）、血红素加氧酶 1（heme oxy‐
          管疾病。动物实验发现，每天以 3 mg/kg GW501516 喂
                                                              genase-1，HO-1）（批号 43966）、裂解型胱天蛋白酶 3
          食低密度脂蛋白受体基因敲除小鼠，可减轻小鼠高脂饮
                                                             （cleaved-caspase-3，C-caspase-3）（批号 9661）、核纤层蛋
                          [3]
          食诱导的血管重构 ；体外细胞实验发现，GW501516能
                                                              白 B1（Lamin B1）（批号 13435）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶
                              [4]
          够改善内皮细胞功能 。活性氧（reactive oxygen spe‐
                                                             （GAPDH）（批号 5174）等一抗均购自美国 Cell Signaling
          cies，ROS）是参与氧化应激的主要分子之一，在血管紧
                                                              Technology 公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗人 IgG
          张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞肥大模型中，GW501516
                                             [5]
          可 抑 制 血 管 平 滑 肌 细 胞 内 产 生 ROS 。 由 此 推 测             二抗（批号ab6858）购自英国Abcam公司。
                                                              1.3 实验细胞
          GW501516可能通过抑制氧化应激，保护PAECs，从而在
          低氧肺血管重构中发挥保护作用。因此，本研究从                                  人 PAECs 购自中国典型培养物保藏中心，批号为
          GW501516 调控氧化应激的角度探讨了其对低氧致                          GPC0037。
          PAECs损伤的影响及机制，以期为GW501516用于临床                       2 方法
          治疗HPH提供参考。                                          2.1 GW501516对PAECs的细胞毒性检测
          1 材料                                                2.1.1 实验分组与给药
          1.1 主要仪器                                                将细胞分为对照组和 GW501516 组，对照组给予
              本研究使用的主要仪器包括 Dmil Led 型倒置荧光                     0.1%DMSO 孵 育 12、24、48  h，GW501516 组 给 予 100
                                                                             [6]
          显微镜（德国 Leica 公司）、3131 型和 311 型细胞培养箱                 nmol/L GW501516 孵育12、24、48 h。
         （美国Thermo Fisher Scientific公司）、Synergy HT型多功         2.1.2 PAECs相对存活率的检测
          能酶标仪（美国 Bio-Tek 公司）、NovoCyte 型流式细胞仪                     采用 CCK-8 试剂盒检测细胞相对存活率，评估
                                                                                                3
         （美国 ACEA Biosciences 公司）、ChemiDoc XRS 型化学            GW501516 的细胞毒性。细胞以 5×10 个/孔均匀接种
          发光成像系统（美国Bio-Rad公司）。                                于96孔板，每组设6个复孔。按“2.1.1”项下方法分组及


          · 180 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2                               中国药房  2024年第35卷第2期
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