Page 58 - 《中国药房》2024年1期

control group， the rats in the model group were in poor mental state， with darker fur， irritable mood， disordered arrangement of
colon glands， inflammatory cell infiltration， cell necrosis and edema； CMDI score， the levels of IL-1β， IL-6 and TNF-α， protein
expressions of HMGB1 and RAGE in colon tissue， the relative abundance of Proteobacteria and Bacteroidetes were significantly
increased （P＜0.05）； body weight， the protein expressions of Claudin-1， Occludin and ZO-1 in colon tissue， the relative
abundance of Firmicutes in the intestine were significantly decreased （P＜0.05）. Compared with the model group， general situation
and pathological damage of colonic tissue in limonin groups were improved， the levels of the above indicators were significantly
reversed （P＜0.05）， and in a dose-dependent manner （P＜0.05）； there was no significant difference in various indexes between
sulfasalazine group and limonin high-dose group （P＞0.05）. CONCLUSIONS Limonin can improve intestinal injury and intestinal
flora disturbance in UC model rats， the mechanism of which may be associated with the down-regulation of HMGB1/RAGE
signaling pathway.
KEYWORDS limonin； ulcerative colitis； intestinal injury； intestinal flora； HMGB1/RAGE signaling pathway

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种慢性炎 6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的酶
症性结肠疾病，由宿主肠道菌群的免疫反应失衡引起， 联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒以及BCA试剂盒（批号
[1]
严重威胁公共健康 。尽管近年来在 UC 诊断和治疗方 分别为 ZQ38677、ZQ3-2744、ZQ2-1144、ZQ2-2204、ZQ2-
[2]
面取得了很大进展，但仍未获得有效的治疗药物 。肠 6159、ZQ1-6658）均购自广州市智取生物科技有限公司；
[3]
道菌群紊乱和肠屏障损伤会加剧 UC 肠道损伤 ，因此， 苏木精-伊红（HE）染色试剂盒、蛋白提取试剂盒、ECL试
TM
寻找可改善肠道损伤和调节肠道菌群的药物对治疗UC 剂、大鼠粪便 DNA 提取试剂盒、Quant-iT dsDNA 分析
具有重要意义。 试剂盒（批号 NY19845、NY46265、NY26877、NY55236、
柠檬苦素是苦参Sophora flavescens Ait.的活性成分 NY22708）均购自山东暖阳生物技术有限公司；兔源紧
之一，其可通过抑制结肠组织中内质网应激来改善由葡 密连接蛋白 1（Claudin-1）、闭合蛋白（Occludin）、闭锁小
聚糖硫酸钠诱导的小鼠慢性结肠炎 。高迁移率族蛋白 带蛋白 1（ZO-1）、HMGB1、RAGE、GAPDH 单克隆抗体
[4]
B1（high mobility group protein B1，HMGB1）/晚期糖基 和羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为 NT21984、
化 终 末 产 物 受 体（receptor for advanced glycation end NT47657、NT50421、NT46342、NT67221、NT65722、
products，RAGE）信号通路是研究UC发生发展过程中的 NT71104）均购自英国Abcam公司。

常见通路，相关研究发现，抑制HMGB1/RAGE信号通路 1.3 动物
可以减轻实验性结肠炎小鼠肠道损伤 。另外，研究显 本研究所用动物为SPF级雄性Wistar大鼠，8周龄，
[5]
示，UC患者血清中HMGB1水平与肠道菌群失衡存在相 共 88 只，体重为 251～269 g，购自广州纳特生物科技有
关性，提示 HMGB1/RAGE 信号通路活性与 UC 患者肠 限公司，动物生产许可证号为SCXK（粤）2022-0014。大
道菌群有关 。基于此，本研究基于 HMGB1/RAGE 信 鼠在温度 24～26 ℃、湿度 50%～60%、光照周期 12 h 的
[6]
号通路，探究柠檬苦素对 UC 模型大鼠肠道菌群紊乱和 环境中饲养。本研究经河北北方学院附属第二医院伦
肠屏障损伤的改善作用及机制，以期为 UC 治疗药物的 理委员会批准，审批号为附二院（伦审）-2022-109。
开发提供理论依据。 2 方法
1 材料 2.1 造模分组与给药
1.1 主要仪器 取 74 只大鼠，禁食不禁水 1 d 后进行麻醉，使用 16
SpectraMax 190 型酶标仪、LW200ET-A 型显微镜、 号灌胃针在润滑油的作用下插入肛门8 cm，向大鼠肠腔
BOT-860SR 型凝胶成像仪均购自广州健仑生物科技有 内一次性缓缓注入5%TNBS（2 mL/kg）和50%乙醇溶液

限公司。 （0.3 mL）后，再注入 0.3 mL 空气，在大鼠腹部轻揉 3
1.2 主要药品与试剂 min，以复制UC模型 。大鼠出现稀便后，随机处死4只
[7]
柳氮磺胺吡啶肠溶片（批号 20220614，规格 0.25 大鼠，若观察到其结肠黏膜上皮出现炎症浸润等病理损
[7]
g/片）购自上海福达制药有限公司；柠檬苦素原料药（纯 伤，则表明造模成功 。将造模成功的70只大鼠随机分
度≥99.78%）和三硝基苯磺酸（trinitrobenzene sulfonic 为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组（12.5、25、50 mg/kg，
acid，TNBS）、白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL- 剂量参考文献[8]设置，临用时以生理盐水溶解）以及柳

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