Page 54 - 《中国药房》2024年1期
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PINK1                            63 kDa
                 Bax                             21 kDa
                                                                    Parkin                           52 kDa
                  Bcl                            26 kDa
                                                                   LC3-Ⅱ                             14 kDa

                β-actin                          43 kDa             β-actin                          43 kDa
                                                                          Ⅰ    Ⅱ     Ⅲ     Ⅳ    Ⅴ
                      Ⅰ     Ⅱ    Ⅲ     Ⅳ     Ⅴ
                                                                 Ⅰ:对照组;Ⅱ:氧化苦参碱2.0 mg/mL组;Ⅲ:氧化苦参碱4.0 mg/mL
             Ⅰ:对照组;Ⅱ:氧化苦参碱2.0 mg/mL组;Ⅲ:氧化苦参碱4.0 mg/mL         组;Ⅳ:氧化苦参碱8.0 mg/mL组;Ⅴ:5-FU组。
          组;Ⅳ:氧化苦参碱8.0 mg/mL组;Ⅴ:5-FU组。                        图4 各组 MG63 细胞中 PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白
           图2 各组MG63细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达的电泳图                           表达的电泳图

          表2 各组MG63细胞线粒体膜电位降低比例和线粒体                           表3 各组 MG63 细胞中 PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白
               自噬水平的检测结果(x±s,n=3)                                  表达水平的检测结果(x±s,n=3)
                                                              组别                PINK1/β-actin  Parkin/β-actin  LC3-Ⅱ/β-actin
           组别                 线粒体膜电位降低比例/%     线粒体自噬水平        对照组               0.090±0.005  0.041±0.003  0.208±0.009
           对照组                   4.37±0.48      1.61±0.39                       0.381±0.014 a  0.176±0.008 a  0.383±0.011 a
           氧化苦参碱2.0 mg/mL组       38.14±4.21 a   7.83±0.62 a   氧化苦参碱2.0 mg/mL组        a          a          a
           氧化苦参碱4.0 mg/mL组       55.79±4.82 a   16.39±1.14 a  氧化苦参碱4.0 mg/mL组   0.824±0.035 a  0.330±0.010 a  0.471±0.014 a
                                                                                           0.484±0.012
                                                              氧化苦参碱8.0 mg/mL组
                                                                                                     0.775±0.029
                                                                                0.913±0.046
           氧化苦参碱8.0 mg/mL组       70.90±6.05 a   24.27±1.48 a                    0.439±0.020 a  0.432±0.015 a  0.560±0.022 a
           5-FU组                 76.23±5.57 a   19.52±1.26 a  5-FU组
                                                                 a:与对照组比较,P<0.05。
             a:与对照组比较,P<0.05。
                                                              3.4 线粒体自噬对氧化苦参碱致 MG63 细胞凋亡的影
          3.3.2 细胞线粒体自噬水平                                     响结果
              与对照组比较,氧化苦参碱各浓度组和 5-FU 组细                       3.4.1 转染后细胞中PINK1、Parkin和 LC3-Ⅱ蛋白表达
          胞中线粒体自噬水平均显著升高(P<0.05)。结果见图                         水平
          3(5-FU组图略)、表2。                                          与对照组比较,PINK1 siRNA组细胞中的PINK1蛋
                                                              白表达水平显著降低(P<0.05),Parkin 和 LC3-Ⅱ蛋白
                                                              表达水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与氧
                                                              化苦参碱组比较,PINK1 siRNA+氧化苦参碱组细胞中
                                                              PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均显著降低(P<
                                                              0.05)。结果见图5、表4。

                                                                    PINK1                            63 kDa
                             5 μm                    5 μm
                                                                    Parkin                           52 kDa
                   A.对照组              B.氧化苦参碱2.0 mg/mL组

                                                                   LC3-Ⅱ                             14 kDa

                                                                    β-actin                          43 kDa
                                                                          Ⅰ       Ⅱ      Ⅲ      Ⅳ
                                                                 Ⅰ:对照组;Ⅱ:PINK1 siRNA组;Ⅲ:氧化苦参碱组;Ⅳ:PINK1
                                                              siRNA+氧化苦参碱组。
                                                              图5 转染后MG63细胞中PINK1、Parkin和LC3-Ⅱ蛋
                             5 μm                    5 μm
                                                                   白表达的电泳图
             C.氧化苦参碱4.0 mg/mL组        D.氧化苦参碱8.0 mg/mL组       表4 转染后MG63细胞中PINK1、Parkin和LC3-Ⅱ蛋
                  图3 各组细胞线粒体自噬的显微图                                 白表达水平的检测结果(x±s,n=3)
          3.3.3 细胞中PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平                   组别                 PINK1/β-actin  Parkin/β-actin  LC3-Ⅱ/β-actin
                                                              对照组                0.371±0.007  0.119±0.003  0.073±0.002
              与对照组比较,氧化苦参碱各浓度组和 5-FU 组细                       PINK1 siRNA组       0.015±0.001 a  0.122±0.005  0.070±0.005
                                                              氧化苦参碱组             1.194±0.013  0.936±0.012  0.802±0.011
          胞中 PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均显著升高
                                                              PINK1 siRNA+氧化苦参碱组  0.079±0.002 b  0.287±0.008 b  0.243±0.009 b
         (P<0.05)。结果见图4、表3。                                      a:与对照组比较,P<0.05;b:与氧化苦参碱组比较,P<0.05。


          · 48 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 1                                中国药房  2024年第35卷第1期
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