Page 51 - 《中国药房》2024年1期
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CONCLUSIONS  Oxymatrine  can  mediate  the  overactivity  of  mitophagy  based  on  the  PINK1/Parkin  signaling  pathway  by
          inhibiting COX-2 expression， thus promoting the apoptosis of the MG63 osteosarcoma cell line.
          KEYWORDS    oxymatrine；  osteosarcoma；  cell  apoptosis；  mitophagy；  cyclooxygenase-2；  PTEN-induced  putative  kinase  protein-
          1； Parkinson disease protein-2


              骨肉瘤通常起源于四肢长骨，是儿童与青少年群体                         对照品（批号343922，纯度≥98%）购自美国Sigma公司；
          最为常见的原发性骨肿瘤。目前，骨肉瘤在全球范围内                           嘌呤霉素、噻唑蓝（MTT）粉末、二甲基亚砜（dimethyl
          的发病率为 4.3%，且骨肉瘤新发病例以每年 0.4% 的速                     sulfoxide，DMSO）溶 液 、JC-1 染 液（批 号 分 别 为 HY-
                [1]
          度增长 。尽管现阶段针对骨肉瘤的治疗已取得较大进                           K1057、HY-15924、HY-Y0320、HY-15534）均 购 自 美 国
          展，但骨肉瘤患者的5年总生存率仍然较低。新辅助化                           MedChemExpress 公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI 凋亡检测试
          疗对骨肉瘤的治疗具有重要意义，但长期化疗容易导致                           剂盒（批号KGA107）购自江苏凯基生物技术股份有限公
                                       [1]
          多药耐药的出现，影响化疗的效果 。中药因具有高效、                          司；青-链霉素溶液（100×）、胰酶消化液、4，6-二氨基-2-
          低毒、多靶点等优势，在骨肉瘤治疗领域的地位不断                            苯基吲哚（DAPI）、BCA蛋白浓度测定试剂盒、ECL发光
          提高 。                                               液 检 测 试 剂 盒（批 号 分 别 为 C0222、C0201、C1005、
              [2]
              氧化苦参碱是中药苦参Sophora flavescens Ait.的主            P0010、P0018M）均购自上海碧云天生物技术公司；兔源
          要成分之一，具有广泛的药理作用和多种生物活性，被                           B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X
                            [3]
          用于多种疾病的治疗 。相关研究发现，氧化苦参碱可
                                                             蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、PTEN诱导激酶1
          通过调节细胞周期进程、抑制肿瘤细胞侵袭和转移、诱
                                                            （PTEN-induced putative kinase-1，PINK1）、帕金森病蛋
          导肿瘤细胞凋亡和自噬等途径来抑制肺癌、肝癌、乳腺
                                                             白2（Parkinson disease protein-2，Parkin）、环氧合酶2（cy‐
                                            [4]
          癌、黑色素瘤、骨肉瘤等多种肿瘤的生长 。线粒体自噬
                                                             clooxygenase-2，COX-2）、β-肌动蛋白（β-cytoskeletal ac‐
          是一种选择性自噬形式，药物可通过影响线粒体自噬信
                                                             tin，β-actin）一抗和辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗
          号通路相关蛋白的表达，调控肿瘤细胞的凋亡，最终达
                                                             兔 免 疫 球 蛋 白 G（IgG）二 抗（批 号 分 别 为 AF6139、
                                  [5]
          到抑制肿瘤细胞增殖的目的 。因此，靶向调控线粒体
                                                             AF0120、DF7742、AF0235、AF7003、AF7018、S0001）均
          自噬已经成为治疗肿瘤的重要途径。但是，氧化苦参碱
                                                             购自江苏亲科生物研究中心有限公司；兔源微管相关蛋
          是否通过调控线粒体自噬来影响骨肉瘤细胞凋亡尚不
                                                             白 1 轻链 3（microtubule-associated protein 1 light chain-
          清楚。基于此，本研究以人骨肉瘤细胞 MG63 为对象，
                                                             3，LC3）和鼠源细胞色素 C 氧化酶多肽亚基 4（cyto‐
          基于线粒体自噬，初步探讨氧化苦参碱促进骨肉瘤细胞
                                                             chrome C oxidase polypeptide Ⅳ，COX Ⅳ）一抗（批号分
          凋亡的作用机制，以期为骨肉瘤的治疗提供新的思路。
                                                             别为 GTX127375、GTX628886）均购自美国 GeneTex 公
          1 材料
                                                                           ®
                                                             司 ；Alexa  Fluor   488 标 记 的 山 羊 抗 鼠 IgG 和 Alexa
          1.1 主要仪器
                                                                 ®
                                                             Fluor  594 标记的山羊抗兔 IgG 荧光二抗（批号分别为
              Thermo371 型 CO2 恒 温 培 养 箱 购 自 美 国 Thermo
                                                             ab150080、ab150113）均购自英国Abcam公司；Lenti-GFP
          Fisher Scientific公司；INFINITE 200 PRO型酶标仪购自
                                                             和Lenti-COX-2-GFP慢病毒均购自上海吉凯基因化学技
          瑞士 Tecan 公司；5424R 型高速冷冻离心机购自德国
                                                             术有限公司；小干扰RNA（siRNA）-mate转染试剂、阴性
          Eppendorf 公司；Eclipse Ni-U 型荧光显微镜购自日本
                                  ®
          Nikon 公司；Mini PROTEAN Tetra Cell 型垂直电泳仪、           对照 siRNA（NC siRNA）、PINK1 siRNA（批号分别为
          Mini TransBlot Cell型蛋白转印系统均购自美国Bio-Rad             G04003、A06001、A01001）均购自上海吉玛制药技术有
          公司；TCS SP5 型激光共聚焦显微镜购自德国 Leica 公                   限公司。
          司；Pannoramic SCAN 型数字玻片扫描系统购自匈牙利                   1.3 细胞
          3DHISTECH 公司；DxFLEX 型流式细胞仪购自美国                         人骨肉瘤 MG63 细胞株（批号 TCHu124）购自中国
          Beckman Coulter公司。                                 科学院细胞库。
          1.2 主要药品与试剂                                        2 方法
              氧化苦参碱对照品（批号为 16837-52-8，纯度≥                    2.1 细胞培养
          99%）购自成都曼斯特生物科技有限公司；DMEM 培养                            将 MG63 细胞培养于含 1% 青-链霉素和 10% 胎牛
          基（批号 11965092）购自美国 Gibco 公司；胎牛血清（批                 血清的DMEM培养基中，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培
          号为 FB15015）购自美国 Clark 公司；5-氟尿嘧啶（5-FU）              养，传至第5代进行后续实验。


          中国药房  2024年第35卷第1期                                                  China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 1    · 45 ·
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