Page 40 - 《中国药房》2024年1期

can repair cell injury by inhibiting LPS induced apoptosis， migration， inflammation and oxidant stress of HMC3 cells， the
mechanism of which may be associated with inhibiting the activity of the NF-κB signaling pathway.
KEYWORDS microglia cells； ephedrine； lipopolysaccharide； nuclear factor-κB signaling pathway； cell function injury

小胶质细胞作为脑内固有的免疫细胞，可参与脑出 测试剂盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒、
血后的脑损伤过程：一方面可吞噬脑损伤部位周围的坏 RIPA 裂解液（批号分别为 S0101S、S0131S、P0013B）均
死组织和细胞碎片，起到神经保护作用；一方面可分泌 购自上海碧云天生物技术有限公司；Transwell小室购自
炎症因子，引起继发性脑损伤 [1―2] 。由此可知，小胶质细 德国 Merck 公司；鼠源 NF-κB、磷酸化 NF-κB（p-NF-
胞同时具有促炎和促修复的双重作用，因此通过调节小 κB）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）标记的羊抗
胶质细胞表型及功能状态可抑制炎症反应、促进修复作 鼠免疫球蛋白 G（IgG）二抗（批号分别为 66535-1-Ig、
用，为脑出血治疗提供研究方向。 3036S、SA00002-1）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；

麻黄碱是一种芳烃仲胺类生物碱，为中草药麻黄的 高糖培养基（H-DMEM）和胎牛血清（fetal bovine serum，
主要成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗代谢紊乱、神经保护、心 FBS）购自美国Hyclone公司。
脏保护及内脏保护等药理活性，广泛应用于各种心脑血 1.3 细胞
[3]
管 疾 病 以 及 神 经 退 行 性 疾 病 的 治 疗 。 核 因 子 κB
人小胶质细胞 HMC3 购自青旗（上海）生物技术发
（nuclear factor-κB，NF-κB）是细胞内关键的核转录因 展有限公司。
子，同时也被认为是重要的炎症小体触发因子，在抗氧 2 方法
化、抗炎方面具有重要作用 [4―5] 。相关研究发现，蛤蚧定
2.1 HMC3细胞培养
喘丸醇提物可通过下调NF-κB信号通路发挥抗炎活性，
将 HMC3 细胞培养在由 90%H-DMEM、10%FBS 和
[6]
该作用可能是蛤蚧定喘丸中的麻黄碱成分发挥的 。但
青霉素-链霉素溶液组成的完全培养基中，并在 37 ℃、
是麻黄碱是否可通过 NF-κB 信号通路改善神经炎症尚
5%CO2培养箱中培养，待细胞贴壁80%时进行传代。
不清楚。基于此，本研究基于 NF-κB 信号通路，探讨麻
2.2 HMC3细胞活力的检测
黄碱对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的小胶质细
采用 CCK-8 法检测。将 HMC3 细胞以 5×10 个/孔
3
胞功能损伤的修复作用及机制，以期为脑损伤治疗药物
的密度接种于96孔板，培养24 h后，分为对照组（不接受
的开发提供参考。
药物处理）、LPS 组（1 μg/mL LPS 处理）、LPS+75 μg/mL
1 材料
麻黄碱组（同时接受1 μg/mL LPS和75 μg/mL麻黄碱处
1.1 主要仪器
理）、LPS+150 μg/mL 麻黄碱组（同时接受 1 μg/mL LPS
Multiskan FC型酶标仪购自美国Thermo Fisher Sci‐
和 150 μg/mL 麻黄碱处理）、LPS+300 μg/mL 麻黄碱组
entific 公司；DXS-3 型荧光显微镜购自上海缔伦光学仪
（同时接受 1 μg/mL LPS 和 300 μg/mL 麻黄碱处理）、
器有限公司；DMI1 型光学显微镜购自德国 Leica 公司；
LPS+600 μg/mL 麻黄碱组（同时接受 1 μg/mL LPS 和
OI1000 型凝胶成像系统购自广州光仪生物科技有限
600 μg/mL麻黄碱处理）。各组加入相应药物处理后，继
公司。
续培养 24 h，然后加入 10%CCK-8 溶液培养 1 h；采用酶
1.2 主要药品与试剂
麻黄碱（批号171241-201809，纯度≥97%）购自上海 标仪检测各孔细胞在 450 nm 波长处的光密度（optical
阿拉丁生物科技有限公司；LPS、NF-κB信号通路抑制剂 density，OD）值，并计算细胞活力：细胞活力（%）＝（OD
BAY11-7082（批号分别为 S11060、S44144）均购自上海 值 LPS组或给药组/OD值对照组 ）×100%。实验重复3次。
源叶生物科技有限公司；NF-κB信号通路激动剂Prostra‐ 2.3 HMC3细胞凋亡的检测
tin（批号 P0077）购自圣克鲁斯生物技术（上海）有限公 采用 Hoechst 33258 荧光染色法检测。将 HMC3 细
司；Hoechst 33258 染色液（批号 E607301）购自生工生物 胞接种于24孔板，当细胞密度达80%时，按“2.2”项下方
工程（上海）股份有限公司；可溶性白细胞介素6（soluble 法分组、给药，培养24 h后，加入10%Hoechst 33258染色
interleukin-6，sIL-6）、白细胞介素 10（interleukin-10，IL- 液避光培养 10 min；采用荧光显微镜观察并拍照，其中
10）的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为 强蓝色信号为凋亡细胞，弱蓝色信号为正常细胞，计算
ml038115、ml064299）均购自上海酶联生物科技有限公 细胞凋亡率：细胞凋亡率（%）＝强蓝色信号细胞数/总蓝
司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检 色信号细胞数×100%。实验重复3次。

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