Page 49 - 《中国药房》2023年22期
P. 49

6），表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
                   1.4
                                                                （6）加样回收率试验：取已知含量的山楂叶药材样
                   1.2
                   1.0                                       品（编号 S43）约 0.5 g，共 6 份，精密称定，分别加入单一
                   VIP值  0.8                                 对照品储备液适量（加入量与已知量相等），按“2.2.2”项
                   0.6
                   0.4                                       下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样分
                   0.2
                                                             析，记录峰面积并计算加样回收率。结果显示，绿原酸、
                    0
                       3   5   1   2   7   6   8   4         牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷和异槲皮
                                  峰号
               图4 78批山楂叶药材8个共有峰的VIP值                         素 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 97.37%、101.44%、
                                                             102.18%、96.79%、102.00%，RSD 分别为 0.51%、0.67%、
          2.4 5种有效成分含量的测定                                    0.46%、0.72%、2.67%（n＝6），表明方法准确度良好。
          2.4.1 方法学考察                                        2.4.2 相对校正因子的计算
             （1）专属性试验：取山楂叶供试品溶液（编号 S43）、                         以牡荆素鼠李糖苷为内参物（含量较高），取“2.4.1
          混合对照品溶液和空白溶液（60%甲醇），按“2.1”项下色                     （2）”项下 1～8 号混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条
          谱条件进样分析，记录色谱图（图略）。结果显示，空白溶                         件进样分析，记录峰面积并按下式计算相对校正因子
          液对各待测成分的测定无干扰，表明方法专属性良好。                          （fK/S ）：fK/S＝（CK×AS ）/（CS×AK ）（CS为内参物的质量浓度，
             （2）线性关系考察：精密吸取“2.2.1”项下5种单一对                    AS为内参物的峰面积，Ck为待测成分的质量浓度，Ak为待
          照品储备液各适量，置于同一 10 mL 容量瓶中，以 50%                     测成分的峰面积）。结果显示，绿原酸、牡荆素葡萄糖
          甲醇溶解并稀释，制成每1 mL含绿原酸192.00 μg、牡荆                    苷、金丝桃苷、异槲皮素的平均相对校正因子分别为
          素葡萄糖苷204.00 μg、牡荆素鼠李糖苷300.00 μg、金丝                 0.401、0.993、1.670、1.615，RSD 分 别 为 1.58%、0.64%、
          桃苷 131.82 μg、异槲皮素 64.36 μg 的混合对照品溶液，               0.38%、0.39%（n＝8）。
          记为1号混合对照品溶液；取1号混合对照品溶液适量，                          2.4.3 不同试验条件对相对校正因子的影响
          用 50% 甲醇分别稀释 2、4、8、16、32、64、128 倍，分别记                  取“2.4.1（2）”项下1～8号混合对照品溶液，按“2.1”
          为2～8号混合对照品溶液。分别取上述1～8号混合对                          项下色谱条件进样分析，考察不同仪器（Agilent 1200、
          照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。                       1100、1220 型 HPLC 仪）、不同色谱柱[Agilent ZORBAX
          以待测成分质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）                        SB-C18、Agilent 5 HC-C18 （2）、Shiseido CAPCELL PAK-
          进行线性回归，结果见表2。                                      C18，规格一致]、不同流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）、不同柱
               表2 5种待测成分的回归方程与线性范围                           温（25、30、35 ℃）对相对校正因子的影响。结果显示，在
          待测成分          回归方程         相关系数（r）   线性范围/（µg/mL）  上述条件下，绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、金丝桃苷、异槲
          绿原酸          Y＝4.64X－0.87   0.999 9   1.50～192.00  皮 素 的 相 对 校 正 因 子 分 别 为 0.374～0.404、0.979～
          牡荆素葡萄糖苷      Y＝11.57X－3.00  0.999 9   1.59～204.00
          牡荆素鼠李糖苷      Y＝11.52X－2.13  0.999 9   2.34～300.00  1.003、1.626～1.725、1.579～1.647，RSD 分别为 2.32%、
          金丝桃苷         Y＝19.71X－6.03  0.999 9   1.03～131.82  0.67%、1.56%、1.24%（n＝12），表明方法耐用性良好。
          异槲皮素         Y＝19.33X－0.47  0.999 9   0.50～64.36   2.4.4 色谱峰定位
             （3）精密度试验：取山楂叶供试品溶液（编号 S43），                         采用相对保留时间法进行色谱峰定位。取“2.4.1
          按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果                       （2）”项下 1～8 号混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条
          显示，绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝                          件进样分析，记录峰面积。以牡荆素鼠李糖苷为内参
          桃苷、异槲皮素峰面积的 RSD 分别为 0.41%、0.29%、                   物，计算其余4个成分的相对保留时间。结果显示，绿原
          0.36%、0.39%、0.53%（n＝6），表明方法精密度良好。                  酸、牡荆素葡萄糖苷、金丝桃苷、异槲皮素的相对保留时
             （4）重复性试验：精密称取山楂叶药材样品（编号                         间分别为 0.422、0.930、1.540、1.218，RSD 分别为 0.04%、
          S43），共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，                    0.02%、0.04%、0.15%（n＝8）。
          再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积并按外标                        2.4.5 样品含量测定及比较
          法计算各成分含量。结果显示，绿原酸、牡荆素葡萄糖                               取 78 批山楂叶药材的供试品溶液，按“2.1”项下色
          苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、异槲皮素含量的RSD分                         谱条件进样分析，记录峰面积，分别采用外标法和
          别为1.57%、2.48%、2.34%、2.44%、1.93%（n＝6），表明方           QAMS 法计算 5 种成分的含量（内参物含量仅以外标法
          法重复性良好。                                            计算），并计算 2 种方法结果的相对偏差（relative de-
             （5）稳定性试验：取山楂叶供试品溶液（编号 S43），                     viation，RD）。各样品平行测定 2 次，结果以平均值展
          分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”项下色谱                 示。结果（图 5）显示，78 批样品中，4 种成分的 2 种方法
          条件进样分析，记录峰面积。结果显示，绿原酸、牡荆素                          含量测定结果较接近，除2批样品（S39和S41）中异槲皮
          葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、异槲皮素峰面积                          素含量的RD值超过5%外，其余成分含量的RD值均不
          的 RSD 分别为 0.63%、0.56%、0.84%、0.66%、1.29%（n＝         高于5%，提示2种检测方法结果无明显差异。


          中国药房  2023年第34卷第22期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22    · 2731 ·
   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54