Page 24 - 《中国药房》2023年22期

siRNA 组细胞上清液中 IL-1β、IL-6 水平均显著降低 4 讨论
（P＜0.05），PGE2水平显著升高（P＜0.05），说明 TRAF6 作为贵州特色苗药，艳山姜常被用于治疗胃溃疡。
蛋白能够激活下游通路，刺激无水乙醇诱导的GES-1细 现代研究表明，黄酮类成分是艳山姜的主要成分，包括

胞分泌炎症因子（表3）。 芦丁、槲皮素和山柰酚等；同时，黄酮类成分也是艳山姜
[10]
的药效成分，具有降压、利尿和抗溃疡的活性 。因此，
TRAF6蛋白表达水平 0.5 ab 对象，评价艳山姜总黄酮对无水乙醇致急性胃溃疡模型
1.5
TRAF6 58 kDa 1.0 本研究以艳山姜总黄酮为干预成分，以人GES-1细胞为
GAPDH 36 kDa 0 细胞的改善作用。结果表明，艳山姜总黄酮能通过抑制
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 细胞中NF-κB p65、TRAF6、TNF-α蛋白的表达和下游炎
A. TRAF6蛋白表达的电泳图 B. TRAF6蛋白表达的柱形图 症因子IL-1β、IL-6的分泌，从而发挥对胃黏膜细胞损伤
（x±s，n＝6）
Ⅰ：空白组；Ⅱ：空白+NC siRNA组；Ⅲ：空白+TRAF6 siRNA组； 的改善作用。
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与空白+NC siRNA组比较，P＜0.05。 miRNA由内源基因编码，对多种生物学行为具有重
图4 敲减TRAF6蛋白的GES-1细胞构建验证结果 要的调节作用，可广泛参与多种基因表达和 RNA 沉默

的调控 [11―12] 。综合既往文献和现代研究进展，本研究选
表3 敲减 TRAF6 对细胞上清液中 IL-1β、IL-6、PGE2
水平的影响（x±s，n＝6） 择了与胃溃疡相关的miR-146a-5p进行研究，结果表明，
在无水乙醇诱导的急性胃溃疡模型细胞中，miR-146a-
组别 IL-1β/（ng/mL） IL-6/（ng/mL） PGE 2/（ng/mL）
模型组 3.17±0.12 5.95±0.35 5.86±0.28 5p 的相对表达量显著降低，而模型+艳山姜总黄酮组细
模型+NC siRNA组 3.14±0.11 5.91±0.34 5.80±0.27 胞中miR-146a-5p的相对表达量显著升高。
模型+TRAF6 siRNA组 2.05±0.08 ab 3.17±0.17 ab 6.84±0.29 ab
为进一步探索 miR-146a-5p 对胃溃疡的调控作用，
a：与模型组比较，P＜0.05；b：与模型+NC siRNA组比较，P＜0.05。
本研究通过 qRT-PCR、Western blot、细胞转染等实验对
3.5 敲减miR-146a-5p对模型细胞中TRAF6蛋白表达 miR-146a-5p的靶点和调控机制进行了探讨。双荧光素
及上清液中IL-1β、IL-6、PGE2水平的影响 酶 报 告 基 因 、RNA 结 合 蛋 白 免 疫 沉 淀 实 验 和 针 对

与模型+艳山姜总黄酮组或模型+艳山姜总黄酮+in‐ TRAF6 蛋 白 的 Western blot 实 验 结 果 均 证 实 了 miR-
hibitor NC组比较，模型+艳山姜总黄酮+miR-146a-5p in‐ 146a-5p与TRAF6蛋白之间存在靶向关系，且miR-146a-
hibitor组细胞中TRAF6蛋白的表达水平和上清液中IL- 5p能够负向调控TRAF6蛋白的表达。本研究经进一步
1β、IL-6水平均显著升高（P＜0.05），PGE2水平显著降低 过表达 miR-146a-5p 或敲减 TRAF6 后发现，无水乙醇致
急性胃溃疡模型细胞上清液中与炎症相关的 IL-1β 和
（P＜0.05）。结果见图5、表4。
IL-6水平均显著降低，而与胃溃疡相关的PGE2水平显著
2.0
TRAF6蛋白表达水平
ab
下游炎症因子的释放，从而发挥抗胃溃疡作用。
1.0
TRAF6 58 kDa 1.5 升高，说明过表达 miR-146a-5p 或敲减 TRAF6 均能抑制
GAPDH 36 kDa 0.5 0 为进一步探索 TRAF6 对下游通路的影响，本研究
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 通过Western blot法对TRAF6下游的NF-κB p65和TNF-
A. TRAF6蛋白表达的电泳图 B. TRAF6蛋白表达的柱形图 α蛋白表达情况进行检测，结果显示，在无水乙醇诱导的
（x±s，n＝6）
Ⅰ：模型+艳山姜总黄酮组；Ⅱ：模型+艳山姜总黄酮+inhibitor NC 急性胃溃疡模型细胞中，艳山姜总黄酮能显著提高上述
组；Ⅲ：模型+艳山姜总黄酮+miR-146a-5p inhibitor组；a：与模型+艳山 蛋白的表达。TRAF6、NF-κB p65、TNF-α均为NF-κB信
姜总黄酮组比较，P＜0.05；b：与模型+艳山姜总黄酮+inhibitor NC组比 号通路上的关键蛋白，而NF-κB通路能够调控胃黏膜上
较，P＜0.05。 皮细胞炎症反应的发生 [13―15] 。研究指出，在生长因子等
图5 敲减 miR-146a-5p 对模型细胞中 TRAF6 蛋白表 活性物质的刺激下，胃溃疡患者的胃黏膜上皮细胞通透
达的影响
性增加，可使有毒物质和病原微生物穿过胃壁，从而激
表4 敲减 miR-146a-5p 对模型细胞上清液中 IL-1β、 活 TRAF6；TRAF6 可进一步激活下游核因子 κB 抑制因
IL-6、PGE2水平的影响（x±s，n＝6） 子B（inhibitory subunit of NF-κB，IкB），使细胞质中原本

组别 IL-1β/（ng/mL） IL-6/（ng/mL） PGE 2/（ng/mL） 与IкB蛋白相结合的NF-кB从复合体中释放出来，并迁
模型+艳山姜总黄酮组 2.28±0.09 5.01±0.29 6.28±0.34 移到细胞核中；细胞核中的NF-кB可触发其他促炎细胞
模型+艳山姜总黄酮+inhibitor NC组 2.31±0.10 4.89±0.27 5.89±0.30
模型+艳山姜总黄酮+miR-146a-5p inhibitor组 3.68±0.28 ab 6.24±0.38 ab 3.47±0.19 ab 因子（如 IL-1β 和 TNF-α）的转录和释放，从而促进溃疡
a：与模型+艳山姜总黄酮组比较，P＜0.05；b：与模型+艳山姜总黄 的发展 [16―18] 。本研究结果还表明，艳山姜总黄酮可上调
酮+inhibitor NC组比较，P＜0.05。 无水乙醇致急性胃溃疡模型细胞中 miR-146a-5p 的表

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