Page 23 - 《中国药房》2023年22期

120 120 c c c 3.3 miR-146a-5p与TRAF6靶向关系的验证结果
90
双荧光素酶报告基因实验结果（图 3A）显示，转染
细胞活力/% 60 细胞活力/% 80 a b TRAF6 WT 后，共转染 miR-146a-5p mimic 细胞的荧光
40
30
素酶活性显著低于共转染 mimic NC 细胞（P＜0.01）；而
0 0
空白组 24 48 60 80 120 空白 模型 24 48 60 80 120 转染TRAF6 MUT后，共转染miR-146a-5p mimic细胞的
组 组
艳山姜总黄酮不同质量 模型+艳山姜总黄酮不同 荧光素酶活性与共转染 mimic NC 细胞比较，差异无统
浓度组/（mg/L） 质量浓度组/（mg/L）
A.艳山姜总黄酮对细胞活力的影响 B.艳山姜总黄酮作用浓度的筛选 计学意义（P＞0.05）。RNA结合蛋白免疫沉淀实验结果
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组 （图 3B）显示，与阴性对照比较，miR-146a-5p 在 TRAF6
比较，P＜0.01。 抗体上的表达显著升高（P＜0.01）。进一步的 Western
图1 艳山姜总黄酮对细胞活力的影响及作用浓度筛选
blot 实验结果（图 3C、3D）显示，与 mimic NC 组比较，转
的结果（x±s，n＝6）
染 miR-146a-5p mimic 后，细胞中 TRAF6 蛋白的表达水
3.2 艳山姜总黄酮对模型细胞中miR-146a-5p、炎症相 平显著降低（P＜0.01）；与 inhibitor NC 组比较，转染
关蛋白表达和上清液中IL-1β、IL-6、PGE2水平的影响 miR-146a-5p inhibitor 后，细胞中 TRAF6 蛋白的表达水

与空白组比较，模型组细胞中 miR-146a-5p 的相对 平显著升高（P＜0.01）。
表达量和上清液中 PGE2水平均显著降低（P＜0.01），细 1.5 a mimic NC 1.5 a
miR-146a-5p mimic
胞中NF-κB p65、TRAF6、TNF-α蛋白的表达水平和上清 荧光素酶活性 1.0 1.0
液中IL-1β、IL-6水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比 0.5 miR-146a-5p相对表达量 0.5
较，模型+艳山姜总黄酮组细胞中miR-146a-5p的相对表 0 0 input 阴性对 anti-
TRAF6 WT TRAF6 MUT 组 照组 TRAF6组
达量和上清液中 PGE2水平均显著升高（P＜0.01），细胞 A.双荧光素酶报告基因实验结果 B. RNA结合蛋白免疫沉淀实验结果
（x±s，n＝3） （x±s，n＝3）
中NF-κB p65、TRAF6、TNF-α蛋白的表达水平和上清液
a
中 IL-1β、IL-6 水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。 1.6 a
TRAF6
结果见图2、表1。 NF-κB p65 65 kDa GAPDH 58 kDa TRAF6蛋白表达水平 1.2
0.8
0.4
36 kDa
1.2
miR-146a-5p相对表达量 0.8 a b TRAF6 58 kDa Ⅰ：mimic NC组；Ⅱ：miR-146a-5p mimic组；Ⅲ：inhibitor NC组；
0
Ⅱ
Ⅰ
Ⅲ
Ⅲ
Ⅱ
Ⅰ
Ⅳ
Ⅳ
C. TRAF6蛋白表达的电泳图
D. TRAF6蛋白表达的柱形图
（x±s，n＝6）
17 kDa
TNF-α
0.4
0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ GAPDH Ⅰ Ⅱ Ⅲ 36 kDa Ⅳ：miR-146a-5p inhibitor组；a：组间比较，P＜0.01。
图3 miR-146a-5p与TRAF6靶向关系的验证结果
A. miR-146a-5p表达的柱形图 B.相关蛋白表达的电泳图
3 3.4 过表达miR-146a-5p或敲减TRAF6对模型细胞上
a c Ⅰ 清液中IL-1β、IL-6、PGE2水平的影响
炎症相关蛋白表达水平 2 1 a b a c Ⅲ 3.4.1 过表达miR-146a-5p实验
Ⅱ
与模型组或模型+mimic NC 组比较，模型+miR-
降低（P＜0.05），PGE2 水平显著升高（P＜0.05），结果
0 146a-5p mimic 组细胞上清液中 IL-1β、IL-6 水平均显著
NF-κB p65 TRAF6 TNF-α 见表2。
C.相关蛋白表达的柱形图
Ⅰ：空白组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：模型+艳山姜总黄酮组；a：与空白组比 表2 过表达miR-146a-5p对模型细胞上清液中IL-1β、
较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组比较，P＜0.05。 IL-6、PGE2水平的影响（x±s，n＝6）
图2 艳山姜总黄酮对模型细胞中 miR-146a-5p 和 NF- 组别 IL-1β/（ng/mL） IL-6/（ng/mL） PGE 2/（ng/mL）
κB p65、TRAF6、TNF-α 蛋白表达的影响（x±s， 模型组 3.20±0.12 6.03±0.38 5.92±0.28
n＝6） 模型+mimic NC组 3.02±0.11 5.89±0.32 5.74±0.27
模型+miR-146a-5p mimic组 2.17±0.09 ab 4.64±0.18 ab 6.93±0.32 ab
表1 艳山姜总黄酮对模型细胞上清液中 IL-1β、IL-6、 a：与模型组比较，P＜0.05；b：与模型+mimic NC组比较，P＜0.05。
PGE2水平的影响（x±s，n＝6） 3.4.2 敲减TRAF6实验
组别 IL-1β/（ng/mL） IL-6/（ng/mL） PGE 2/（ng/mL） 转染 TRAF6 siRNA 后，细胞中 TRAF6 蛋白的表达
空白组 3.17±0.12 5.95±0.35 6.86±0.38 水平显著低于空白组细胞和转染NC siRNA的细胞（P＜
模型组 18.32±1.13 a 18.11±1.22 a 3.14±0.19 a
模型+艳山姜总黄酮组 8.25±0.32 b 8.68±0.92 b 4.53±0.23 b 0.05），表明敲减TRAF6蛋白的GES-1细胞构建成功（图
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。 4）。与模型组或模型+NC siRNA 组比较，模型+TRAF6

中国药房 2023年第34卷第22期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 22 · 2705 ·