Page 20 - 《中国药房》2023年22期
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knockdown，  the  levels  of  IL-1β  and  IL-6  were  decreased  significantly  in  cell  supernatant，  while  the  level  of  PGE2  was  increased
          significantly （P＜0.05）. After miR-146a-5p knockdown， the levels of IL-1β and IL-6 in cell supernatant and the protein expression
          of  TRAF6  in  cells  administered  with  total  flavonoids  of  A.  zerumbet  were  increased  significantly，  while  the  level  of  PGE2  was
          decreased significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS Total flavonoids of A. zerumbet can improve the gastric mucosa injury induced
          by  absolute  ethanol.  The  mechanism  may  be  related  to  up-regulating  the  expression  of  miR-146a-5p，  inhibiting  the  expression  of
          TRAF6， and further inhibiting the secretion of related inflammatory factors.
          KEYWORDS     total  flavonoids  of Alpinia  zerumbet；  gastric  mucosa  cell；  microRNA-146a-5p；  TNF  receptor-associated  factor  6；
          anti-gastric ulcer effect



              艳山姜是姜科植物艳山姜 Alpinia zerumbet（Pers.）             1 材料
          Burtt. et Smith 的干燥根及根茎，是贵州特色苗药，能温                  1.1 主要仪器
          中燥湿、行气止痛，可用于心腹冷痛、胸腹胀满、消化不                               本研究所用主要仪器包括 CFX96 型定量实时聚合
                         [1]
          良、呕吐腹泻等症 。本课题组前期研究结果表明，艳山                           酶链式反应（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）仪、
                                                                            TM
          姜可通过抑制氧化应激和炎症反应而减轻胃黏膜损伤，                            Trans-Blot Turbo 型Western转膜仪、DDY-10型电泳仪、
          对无水乙醇和阿司匹林诱导的小鼠急性胃溃疡均有明                             Gel Doc XR 型凝胶成像分析仪（美国 Bio-Rad 公司），
                      [2]
          显的改善作用 ，但关于其药效物质基础和分子机制尚                            D180型CO2恒温培养箱（深圳市瑞沃德生命科技有限公
                                                              司），SMZ645 型光学显微镜（日本 Nikon 公司），YT-
          不明确。有研究指出，黄酮类成分是艳山姜中的主要成
                                                              MB96A 全自动多功能酶标仪（山东云唐智能科技有限
          分，其中二氢-5，6-脱氢香豆素、5，6-脱氢卡因均具有抗
                                                              公司）等。
          实验性溃疡的作用，二氢-5，6-去氢醉椒素、5，6-去氢醉
                                                              1.2 主要药品与试剂
          椒素均能拮抗实验性胃溃疡和十二指肠溃疡，山柰酚可
                                                                  艳山姜药材采自贵州省罗甸县，经贵州中医药大学
          通过调控白三烯C4和前列腺素E的表达而发挥抗溃疡
                                                              药学院孙庆文教授鉴定为姜科植物艳山姜 A. zerumbet
          作用  [3―4] 。由此推测，黄酮类成分可能是艳山姜抗溃疡
                                                             （Pers.）Burtt. et Smith的干燥根及根茎，标本存放于贵州
          的有效成分。
                                                              中医药大学药学院产地加工与炮制实验室（标本号
              微 RNA（microRNA，miRNA）是内源性的小非编码                  GY20221005001）。
          RNA（长度为 17～25 个核苷酸），可通过直接与靶基因                           兔源 TRAF6、NF-κB p65、TNF-α、甘油醛-3-磷酸脱
          的 3′-非翻译区（3′-untranslated region，3′-UTR）结合来         氢酶（GAPDH）单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的山
          负向调控该靶基因的表达，从而参与多种生理过程                      [5―6] 。  羊抗兔 IgG 二抗（批号分别为 CL647-66498、10745-1-
          研究指出，miRNA-146a-5p（miR-146a-5p）过表达可降低               AP、17590-1-AP、10494-1-AP、SA00001-2）均购自武汉三
          核因子 κB p65（nuclear factor-κB p65，NF-κB p65）蛋白       鹰生物技术有限公司；过表达 miR-146a-5p（miR-146a-
          及 mRNA 的表达水平，同时还能减少炎症因子[肿瘤坏                         5p mimic）及其阴性对照（mimic NC）、敲减 miR-146a-5p
          死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素          （miR-146a-5p inhibitor）及其阴性对照（inhibitor NC）、敲
          1β（interleukin-1β，IL-1β）]的分泌，并可负向调控应激性              减 TRAF6（TRAF6 siRNA）及其阴性对照（NC siRNA）、
                                               [7]
          胃溃疡的炎症反应，从而发挥抗胃溃疡作用 ；进一步研                           含TRAF6野生型（TRAF6 WT）或突变型（TRAF6 MUT）
                                                              的3′-UTR片段均购自生工生物工程（上海）股份有限公
          究表明，miR-146a-5p 可通过预测靶蛋白肿瘤坏死因子
                                                              司 ；腺 病 毒 表 达 载 体 pacAd5  CMV-GFP（ 批 号
          受 体 关 联 因 子 6（TNF  receptor-associated  factor  6，
                                                              VECT10037）购自北京华越洋生物科技有限公司；荧光
          TRAF6）而进一步影响 NF-κB 的下游通路，抑制人肝星
                                                              素酶pmirGLO载体（批号GN1439）购自上海盖宁生物科
          状细胞中相关细胞因子的信号转导，对炎症反应具有重
                                                              技 有 限 公 司 ；Lipofectamine  3000 转 染 试 剂（批 号
                      [8]
          要的调节作用 。基于艳山姜的传统功效、miRNA的研
                                                              MAN0009872）购自美国Sigma公司；正常兔IgG单克隆
          究进展和本课题组的前期探索，本研究拟以人胃黏膜细
                                                              抗体（货号10010322-1）购自深圳艾美捷科技有限公司；
          胞为对象，以无水乙醇诱导建立急性胃溃疡模型，通过                            RNA 提 取 试 剂 盒 、逆 转 录 试 剂 盒（批 号 分 别 为
          检测细胞中 miR-146a-5p 与胃溃疡、炎症相关指标的表                     CW0581M、CW2569M）均购自康为世纪生物科技股份
          达/含量，探讨艳山姜总黄酮能否通过调控 miR-146a-5p                     有限公司；IL-1β、IL-6、前列腺素 E2 （prostaglandin E2，
          来发挥抗胃溃疡作用，为艳山姜及其活性成分的开发及                            PGE2 ）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒（货号分
          利用提供实验基础。                                           别为A220819、A220815、A220806）均购自武汉华联科生


          · 2702 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22                            中国药房  2023年第34卷第22期
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