Page 50 - 《中国药房》2023年21期

min后，PBS避光清洗3次，5 min/次；采用共聚焦显微镜 意义（P＞0.05），结果见图4。以上结果表明，0.1 μmol/L
在532 nm波长处进行观测，并随机选取视野拍照。 绿原酸可显著抑制 LPS 对巨噬细胞的激活，并提高
2.3.5 干扰TREM2表达后细胞中TREM2、iNOS和NF- TREM2蛋白表达水平，且未对细胞增殖产生显著影响，故
κB p65蛋白表达水平的检测 本研究选择浓度为0.1 μmol/L的绿原酸进行后续实验。
按“2.1.3”项下方法接种细胞，常规培养，待细胞贴 140
壁后，按“2.3.2”项下方法分组、处理，每组 4 个复孔。培 120 a a b b
养结束后，按“2.1.3”项下方法操作检测TREM2、iNOS和 （ pg/mL ） 100 b b TNF-α
NF-κB p65 蛋白表达水平，iNOS、GAPDH、TREM2、β- 80 IL-1β
actin、NF-κB p65一抗的稀释比例分别为1∶500、1∶1 000、 促炎性因子水平/ 60 b b
40
1∶200、1∶1 000、1∶200。以iNOS蛋白与GAPDH蛋白的灰 20
度值比值表示 iNOS 蛋白的表达水平，以 TREM2、NF- 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
κB p65 蛋白与 β-actin 蛋白的灰度值比值分别表示 Ⅰ：Control组；Ⅱ：LPS处理组；Ⅲ：0.01 μmol/L绿原酸干预组；
TREM2、NF-κB p65蛋白的表达水平。 Ⅳ：0.1 μmol/L绿原酸干预组；Ⅴ：1 μmol/L绿原酸干预组；a：与Control
2.4 统计学方法 组比较，P＜0.05；b：与LPS处理组比较，P＜0.05。
实验数据采用SPSS 20.0软件进行分析处理。所有 图2 不同浓度绿原酸对巨噬细胞中 TNF-α、IL-1β 水
数据均采用x±s表示，组间差异采用单因素方差分析和 平的影响（x±s，n＝8）
Tukey多重比较检验进行分析。检验水准α＝0.05。 iNOS 131 kDa
3 结果 GAPDH 37 kDa
3.1 LPS造模浓度的筛选结果
1.2
与 Control 组 [（7.25±2.22） pg/mL] 比 较 ，10、100
1.0
ng/mL LPS处理组细胞培养上清液中IL-6水平[（121.80± 0.8 a c
8.85）、（126.30±8.65） pg/mL]均显著升高（P＜0.05）。 iNOS/GAPDH 0.6
与 Control 组（0.12±0.02）比较，10、100 ng/mL LPS 处理 0.4
b
组细胞中 iNOS 蛋白表达水平（0.84±0.06、0.86±0.04） 0.2
均显著升高（P＜0.05），且 10、100 ng/mL LPS 处理组间 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
细胞中iNOS蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P＞ A. iNOS
0.05）。因此，本研究选择质量浓度为 10 ng/mL 的 LPS
TREM2 26 kDa
进行后续实验。iNOS蛋白表达的电泳图见图1。
β-actin 45 kDa
iNOS 131 kDa
1.0
0.8
GAPDH 37 kDa b
Control组 1 ng/mL 10 ng/mL 100 ng/mL 0.6
LPS处理组 LPS处理组 LPS处理组 TREM2/β-actin
图1 不同质量浓度 LPS 作用下巨噬细胞中 iNOS 蛋白 0.4
表达的电泳图 0.2
0
3.2 绿原酸给药浓度的筛选结果 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
结果（图2）显示，与Control组比较，LPS处理组培养 B. TREM2
Ⅰ：Control组；Ⅱ：LPS处理组；Ⅲ：0.01 μmol/L绿原酸干预组；Ⅳ：
基中TNF-α、IL-1β水平显著升高（P＜0.05）；与LPS处理
0.1 μmol/L绿原酸干预组；Ⅴ：1 μmol/L绿原酸干预组；a：与Control组
组比较，0.01、0.1、1 μmol/L绿原酸干预组细胞培养上清 比较，P＜0.05；b：与LPS处理组比较，P＜0.05；c：与0.1 μmol/L的绿原
液中TNF-α、IL-1β水平均显著降低（P＜0.05）。与Con‐ 酸干预组比较，P＜0.05。
trol组比较，LPS处理组细胞中iNOS蛋白表达水平显著 图3 不同浓度绿原酸对巨噬细胞中 iNOS、TREM2 蛋
升高（P＜0.05）；与 LPS 处理组比较，0.1 μmol/L 绿原酸 白表达水平的影响（x±s，n＝4）
干预组细胞中 iNOS 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）； 3.3 TREM2在绿原酸抑制巨噬细胞激活中的作用
与0.1 μmol/L绿原酸干预组比较，1 μmol/L 绿原酸干预 3.3.1 转染 TREM2-siRNA 对巨噬细胞中 TREM2 蛋白
组细胞中 iNOS 表达水平显著升高（P＜0.05），结果见图 表达水平的影响
3A。与LPS处理组比较，0.1 μmol/L 绿原酸干预组细胞 结果（图 5）显示，TREM2-siRNA 可显著降低细胞
中TREM2蛋白表达水平显著升高（P＜0.05），结果见图 TREM2 蛋白表达水平（P＜0.05），表明 TREM2-siRNA
3B。此外，上述各处理组间细胞活力比较差异无统计学 的干扰有效，可用于后续实验。

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