Page 52 - 《中国药房》2023年21期

3.3.4 干扰TREM2表达对TREM2、NF-κB p65和iNOS 4 讨论
蛋白表达水平的影响 现代医学研究发现，绿原酸具有抗炎、抗肿瘤、抗氧
与 Control 组比较，LPS 处理组细胞中 iNOS 和 NF- 化和心血管保护等作用 ，但目前其作用机制尚不十分
[10]
κB p65 蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）；与 LPS 处 明确，这也大大限制了绿原酸的临床应用。巨噬细胞是
理组比较，绿原酸+LPS 组细胞中 iNOS 和 NF-κB p65 蛋 一种分布于人体血液循环和肺内的免疫细胞，在炎症反
白表达水平均显著降低、TREM2 蛋白表达水平显著升 应过程中，巨噬细胞受到刺激后，可分泌大量促炎性细
高（P＜0.05）；与绿原酸+LPS组比较，TREM2-siRNA+绿 胞因子，如 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 等，高浓度的促炎性细
原酸+LPS组细胞中iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平均 胞因子可增强人体内的炎症反应程度，对心、脑、肾、肝
显著升高、TREM2 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）， 等多个脏器造成损伤。若巨噬细胞的引起的炎症反应
TREM2-siRNA 明显逆转了绿原酸的上述作用；而 SC- 得不到有效控制，可引起全身炎症反应综合征，甚至导
[11]
siRNA 未对绿原酸产生的上述作用造成影响。以上结 致死亡 。因此，控制或抑制巨噬细胞的过度激活，被
果表明，绿原酸可通过巨噬细胞TREM2介导，降低LPS 认为是治疗炎症相关疾病的关键环节。目前研究发现，
引起的巨噬细胞激活。结果见图8、图9。 巨噬细胞激活后可处于2种状态：经典激活状态（M1状
态）和选择性激活状态（M2状态）。M1状态的巨噬细胞
TREM2 26 kDa 目前认为是有害的，而 M2 状态的巨噬细胞被认为是有
NF-κB p65 65 kDa 益的。因此，将巨噬细胞调控至 M2 状态是治疗这类炎
症反应相关疾病的关键环节 [12―13] 。本课题组使用LPS刺
β-actin 45 kDa
激巨噬细胞，引起细胞激活，观察使用绿原酸后对 LPS
1.2 引起巨噬细胞激活水平的影响。结果发现，绿原酸可显
1.1
1.0 a c 著减弱LPS对巨噬细胞的激活作用，降低巨噬细胞的炎
0.9
蛋白相对表达水平 0.7 b b c TREM2 症反应程度。促炎性细胞因子（如 TNF-α 和 IL-6）分泌
0.8
NF-κB p65
0.6
增加和iNOS蛋白表达上调，表明巨噬细胞处于M1激活
0.5
0.4
0.3
0.2 状态；而绿原酸降低了巨噬细胞促炎性细胞因子分泌和
0.1 iNOS蛋白表达水平，说明该药物减少了处于M1激活状
0 [14]
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 态的巨噬细胞数量，具有明显的抗炎能力 。由于 NF-
Ⅰ：Control组；Ⅱ：LPS处理组；Ⅲ：绿原酸+LPS组；Ⅳ：TREM2- κB 调控了很多炎症反应相关的基因，且巨噬细胞促炎
siRNA+绿原酸+LPS组；Ⅴ：SC-siRNA+绿原酸+LPS组；a：与Control组 性细胞因子分泌水平的高低，受NF-κB蛋白表达水平调
比较，P＜0.05；b：与LPS处理组比较，P＜0.05；c：与绿原酸+LPS组比 [14]
控 ，因此，本研究检测了巨噬细胞中NF-κB p65的蛋白
较，P＜0.05。
表达水平。结果发现，LPS刺激可明显升高巨噬细胞中
图8 干扰 TRME2 表达对 TREM2 和 NF-κB p65 表达
NF-κB p65 蛋白表达水平，而绿原酸可明显抑制 LPS 引
的影响（x±s，n＝4）
起的NF-κB p65蛋白表达上调。以上结果表明，绿原酸
iNOS 131 kDa 可抑制LPS引起的巨噬细胞炎症反应。
髓样细胞触发受体（TREM）是在 2000 年被发现的
GAPDH 37 kDa
一类免疫球蛋白超家族，目前已知 TREM家族有 3 个成
1.0
[15]
员 ，分 别 为 TREM1、TREM2 和 TREM3 。 其 中 ，
0.8 a c TREM1和TREM2是目前研究较多的2个TREM家族成
iNOS/GAPDH 0.6 b 员，其结构较为相似，但其功能大有不同——TREM1对

0.4
炎症反应起着促进和放大的作用，而 TREM2 对炎症反
0.2 应起着抑制的作用。研究表明，TREM2 表达上调可抑
[16]
0 制免疫细胞分泌炎症因子，减轻炎症损伤 。研究表
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
明，TREM2 基因敲除肺炎模型小鼠与野生型小鼠相比，
Ⅰ：Control组；Ⅱ：LPS处理组；Ⅲ：绿原酸+LPS组；Ⅳ：TREM2-
siRNA+绿原酸+LPS组；Ⅴ：SC-siRNA+绿原酸+LPS组；a：与Control组 前者肺炎的严重程度和死亡率显著降低，其机制可能是
比较，P＜0.05；b：与LPS处理组比较，P＜0.05；c：与绿原酸+LPS组比 肺泡巨噬细胞上的 TREM2 基因敲除后，细胞吞噬能力
[17]
较，P＜0.05。 显著增加，清除细菌等病原微生物的能力增强 。另一
图9 干 扰 TRME2 表 达 对 iNOS 表 达 的 影 响（x±s， 项研究表明，与巨噬细胞特性类似的小胶质细胞，其
n＝4） TREM2表达上调后，可显著抑制小胶质细胞激活，通过

· 2606 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 21 中国药房 2023年第34卷第21期