Page 43 - 《中国药房》2023年21期

2.1.4 色谱条件 2.1.6 线性关系考察及检测限、定量限测定
采 用 Agilent Eclipse Plus C18 （3.0 mm×150 mm， 分别精密吸取“2.1.1”项下11种单一对照品储备液，
1.8 µm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）为流 以甲醇逐步稀释制成各成分质量浓度均分别约为0.5、1.0、
动相进行梯度洗脱（0～10 min，20%A→60%A；10～11 5.0、10.0、20.0 μg/mL的11种混合对照品溶液，其中大黄
min，60%A→80%A；11～15 min，80%A→85%A；15～18 酚及大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的线性最高点质量浓度
min，85%A→20%A）；流速为 0.3 mL/min；检测波长为 放宽至约 50.0 μg/mL，土大黄苷放宽至约 80.0 μg/mL。
254 nm；柱温为 30 ℃；进样量为 5 µL；检测时间为 20 按“2.1.4”项下色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标
min。 （Y）、各对照品质量浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，建
立回归方程（表 1）。结果表明，各成分在各自检测的质
2.1.5 系统适用性试验及专属性考察
量浓度范围内与峰面积线性关系良好（r≥0.999 3）。
取上述混合对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶
表1 芦荟大黄素等 11 种成分的线性关系考察结果及
液（样品编号 a1、b1、c1、d1、e1、f1、g1、h1）各 5 μL，按
检测限、定量限
“2.1.4”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。结
检测限/ 定量限/
果表明，在该色谱条件下，理论板数均不小于33 820，各 成分 线性范围/（μg/mL） 回归方程 r （μg/mL）（μg/mL）
色谱峰与相邻峰的分离度均大于 1.5，各成分测定不受 芦荟大黄素 0.519 7～20.79 Y＝88 798.1X+4 202.1 0.999 9 0.050 0.150
大黄酸 0.515 1～20.64 Y＝71 760.0X+12 177.8 0.999 5 0.050 0.149
其他组分的干扰，并且阴性样品在11种检测成分出峰时
大黄素 0.497 2～19.89 Y＝64 645.2X+18 338.1 0.999 8 0.046 0.138
间处均未出现干扰峰。 大黄酚 0.534 6～53.46 Y＝94 861.4X+27 351.3 0.999 9 0.055 0.166
大黄素甲醚 0.504 0～20.20 Y＝33 549.3X+12 029.0 0.999 6 0.084 0.252
1.20
1.10 土大黄苷 0.507 0～81.12 Y＝67 180.8X－17 617.6 0.999 9 0.021 0.064
1.00 7
0.90 芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷 0.514 0～20.56 Y＝37 096.9X+1 752.7 0.999 4 0.029 0.086
0.80
0.70 大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷 0.528 2～21.13 Y＝19 149.6X－5 843.1 0.999 7 0.060 0.180
AU 0.60 10
0.50 8 大黄素-8-O-葡萄糖苷 0.491 9～19.68 Y＝23 691.8X－6 889.2 0.999 3 0.056 0.168
0.40
0.30 9 大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷 0.535 1～51.40 Y＝32 414.1X－1 223.8 0.999 8 0.043 0.128
0.20 1 2 5 大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷 0.516 4～20.66 Y＝29 857.1X－1 579.1 0.999 3 0.055 0.166
0.10 3 4 6 11
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 另按“2.1.1”项下方法稀释各成分的单一对照品储
t/min
A.混合对照品溶液 备液，按“2.1.4”项下色谱条件分别进样 5～10 μL 测
0.60 定，以信噪比 3∶1 测得各成分的检测限；同法分别进样
0.55
0.50
0.45 15～25 μL 测定，以信噪比 10∶1 测得各成分的定量限。
0.40
0.35 结果见表 1。
AU 0.30
0.25 2.1.7 精密度试验
0.20
0.15
0.10 精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液 5 μL，按
0.05
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 “2.1.4”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。
t/min 结果显示，芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-
B.阴性样品溶液
0.60 葡萄糖苷、土大黄苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-
0.55 O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟
0.50 3
5
0.45 4 10 大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的
0.40 RSD 分 别 为 1.02％ 、1.55％ 、0.61％ 、0.49％ 、0.90%、
1 6 7
0.35 9 11 a1
8 0.74%、1.18%、0.83%、0.86%、0.77%、1.32%（n＝6），表明
AU 0.30 2 b1
0.25 c1 仪器精密度良好。
0.20 d1
2.1.8 重复性试验
0.15 e1
0.10 f1 分别称取同一批样品（编号f1）6份，每份0.6 g，精密
0.05 g1 称定，置于 50 mL 具塞锥形瓶中，按“2.1.2”项下方法制
0 h1
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 备供试品溶液，按“2.1.4”项下色谱条件进样测定，记录
t/min
C.供试品溶液 峰面积，以外标法按峰面积计算样品含量。结果显示，
1：芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷；2：大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷；3：土 样品中芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡
大黄苷；4：大黄素-8-O-葡萄糖苷；5：大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷；6：大
萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖
黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷；7：芦荟大黄素；8：大黄酸；9：大黄素；10：
大黄酚；11：大黄素甲醚；a1～h1：8家企业样品。 苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄
图1 混合对照品、阴性样品和供试品的UPLC图 酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均含量分别为
中国药房 2023年第34卷第21期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 21 · 2597 ·