Page 83 - 《中国药房》2023年20期
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2.4 样品含量测定                                                               欧氏距离
                                                                      0                  5                   10                 15                 20                  25
              取不同批次八宝惊风散，按“2.2.2”项下方法制备成                             A1
          供试品溶液，再按“2.1”项下检测条件进样分析，按外标                                A2

          法计算各批次样品中胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠的                                   A3
          含量，结果见表2。                                                  C2
          表2 不同厂家八宝惊风散样品的含量测定结果（n＝3）                                 B2
                      胆酸          猪去氧胆酸         牛磺胆酸钠                B3
          编号
                 含量/（mg/g）  RSD/%  含量/（mg/g）  RSD/%  含量/（mg/g）  RSD/%  B1
          A1      1.481   6.1   1.772   8.1   1.511   5.9
                                                                     C1
          A2      1.389         1.801         1.586
          A3      1.569         2.049         1.697                  C3
          B1      1.187   7.1   1.888   23.4  1.078  10.0            图2 9批八宝惊风散聚类分析树状图
          B2      1.081         1.201         1.285          3 讨论
          B3      1.244         1.415         1.291
                                                             3.1 测定方法的选择
          C1      0.811   51.5  0.955   40.3  0.664  52.2
          C2      1.711         1.389         1.752              胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠均为甾体类化合
          C3      0.702         0.599         0.887
                                                             物，紫外吸收为末端吸收，使用常规的紫外检测器难以
          均值      1.242   27.2  1.452   32.8  1.306  28.6
                                                                                                         [7]
                                                                         [6]
                                                             取得理想效果 。也有学者采用蒸发光散射检测器 或
          2.5 样品数据分析                                                     [8]
                                                             者衍生化方法 对其进行检测，但蒸发光散射检测器灵
              对表 2 数据进行描述性及探索性分析，结果显示，3
                                                             敏度相对较差，在待测成分含量较低时表现不佳，且待
          个厂家样品之间胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠含量存
                                                             测成分的峰纯度无法考证，而衍生化方法的操作较繁
          在一定差异，推测是由于投料的人工牛黄质量差异或者
                                                             琐。八宝惊风散处方药味复杂，人工牛黄处方量小，基
          生产工艺不同导致的。A厂家样品3个成分的平均含量                           质干扰严重，笔者前期尝试采用普通液相色谱法进行分
          均高于其他2个厂家样品，且批间差异最小；C厂家样品                          析，未能成功。因此，本研究采用灵敏度和选择性均更
          3 个成分的平均含量均低于其他 2 个厂家样品，且批间
                                                             高的超高效液相串联质谱法进行测定。
          差异较大。这表明 A 厂家样品中人工牛黄的质量和对                          3.2 色谱条件及质谱条件的确定
          生产工艺的控制能力可能优于其他 2 个厂家；C 厂家样                            本课题组前期考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-10
          品的质量相对较差，批间差异大，质量控制不稳定。应                           mmol/L乙酸铵溶液、甲醇-10 mmol/L乙酸铵溶液4个溶

          用IBM SPSS软件，采用组间连接系统聚类法，以平方欧                       剂系统，结果表明，水相采用纯水或乙酸铵溶液，有机相
          氏距离为测度进行聚类分析，结果见图 2。当欧氏距离                          采用甲醇或乙腈对分离的影响均不大；考虑到乙腈柱压
          为 7.0 时，9 批样品可聚为 3 类，A1～A3、C2 为第 1 类，              更小，添加乙酸铵与否对分离及灵敏度无影响，故最终
          B1～B3 为第 2 类，C1、C3 为第 3 类，基本可以区分不同                 选用了乙腈-水作为流动相。本课题组还考察了等度和
          厂家的样品；但 C 厂家有 1 批样品与 A 厂家的 3 批样品                   梯度洗脱的区别，结果发现，梯度洗脱峰形较好，且梯度
          归为一类，其可能原因为C厂家的人工牛黄原料批间差                           洗脱对样品中吸附在色谱柱上的强保留杂质有较好的
          异较大或生产工艺批间差异较大。上述结果表明，不同                           洗脱作用，有利于延长色谱柱的寿命。因胆汁酸类成分
          批次样品3个成分的含量存在一定的差异，这可能与厂                           含有羧基，易形成负离子，因此质谱离子源采用了负离
          家所用原料和生产工艺存在差异有关。                                  子模式电离。本课题组还比较了单四极杆模式及多反
              以 3 个成分的含量为变量，对 9 批样品进行主成分                     应监测模式，结果发现，胆酸、猪去氧胆酸、牛磺胆酸钠
          分析，以主成分的特征值及贡献率作为选择主成分的依                           的分子离子均有较大响应，但采用多反应监测模式的二
          据，结果，主成分 1 特征值为 2.589，贡献率为 86.285%，                级碎片离子响应较小。为了使建立的方法更加灵敏，本

          是唯一主成分。计算3个厂家样品的主成分综合得分，                           研究选用了单四极杆模式。
          A、B、C 3 个厂家样品的得分分别为 2.36～2.63、1.77～                3.3 提取方法的考察
          2.04、1.09～2.43，RSD 分别为 6.2%、7.2%、47.3%。以主              本课题组前期比较了甲醇直接提取和样品加稀盐
          成分综合得分为指标进行聚类分析，结果（图略）与含量                          酸酸化后再以氯仿提取两种提取方法，结果表明，两种
          聚类分析结果基本一致。                                        方法均能提取出胆汁酸类成分，但酸化后再用氯仿提取


          中国药房  2023年第34卷第20期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 20    · 2505 ·
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