Page 78 - 《中国药房》2023年20期

OD值 间体已处于非流体状态；若使用高质量浓度非流体状态
10.00
0.8
0.6 的胶原蛋白，冻干所得制剂将没有疏松、多孔、结构均匀
9.00 OD值 0.4 的海绵骨架，其吸收能力将会大大减弱，甚至会与纤维
（ IU/cm 2 ） 8.00 0.2 0 蛋白原层分离；若通过高温或酶水解来增加胶原蛋白的
B/ －0.2
7.00 溶解度，则难以保持其三螺旋结构，冻干所得制剂的蛋
10.00 9.00 白组织结构亦不稳定，止血时极易发生溶解。因此，本
6.00 9.00 7.00 2
8.00
3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 B/ （ IU/cm） 7.00 5.00 A/ （ mg/cm）
2 研究选择了胶原蛋白含量 2.5～7.5 mg/mL 进入下一步
A/（mg/cm） 6.00 3.00
2
A. 因素A与B的等高线图 B. 因素A与B的响应面图 优化实验。在纤维蛋白原、凝血酶含量的单因素考察
OD值 中，因纤维蛋白原层的溶解度和吸水力并不强，故为更
7.50 0.8
0.6 好地体现纤维蛋白原与凝血酶的效价强度，本研究只选
6.50
0.4 择了黏合强度作为效应指标进行分析，从而更准确地选
（ mg/mL ） 5.50 OD值 0.2 0 择两者需优化的含量范围。
C/ 4.50 －0.2
3.50 然而，止血敷料的止血性能除了与创面黏附的牢固
7.50 9.00
6.50 性有关外，还与其是否能快速吸收渗出血液和与创面黏
2.50 5.50 7.00 2
4.50
3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 C/ （ mg/mL ） 3.50 5.00 A/ （ mg/cm） 合的持久性相关（以预防止血物短时间内发生移位脱
2
A/（mg/cm） 2.50 3.00
C. 因素A与C的等高线图 D. 因素A与C的响应面图 离）。因此，本研究在Box-Behnken-响应面优化设计中，
引入黏合强度、持黏力和吸水力作为效应指标，并以三
OD值
7.50 0.8
0.6 者的OD值作为综合评价的响应值。虽然本研究并未在
6.50 方差分析中发现这3个主要成分含量（即3个因素）之间
（ mg/mL ） 5.50 OD值 0.4 0 的交互作用，但进一步的响应面分析结果显示，这3个因
0.2
C/ 4.50 －0.2 素之间存在一定的两两交互作用；同时，笔者前期分别
3.50
7.50 10.00
6.50 9.00 对3个效应值（Y1、Y2、Y3 ）进行了分析，发现3个因素间是
2.50 5.50 8.00
4.50 2
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 C/ （ mg/mL ） 3.50 7.00 B/ （ IU/cm） 有显著的交互作用存在，前后结果的差异可能与拟合
B/（IU/cm） 2.50 6.00
2
E. 因素B与C的等高线图 F. 因素B与C的响应面图 OD值后部分交互作用被抵消有关。
图2 各因素交互作用对OD值影响的等高线图和响应 本研究最终优化得 DBT 最优配方为纤维蛋白原含
2
2
面图 量 6.93 mg/cm 、凝血酶含量 8.15 IU/cm 、胶原蛋白含量
按上述最优配方制备 3 批 DBT，所得 OD 值分别 5.90 mg/mL；结合生产实际，最终确定最优配方为纤维
2
2
0.727 5、0.722 0、0.730 3，平均 OD 值为 0.726 6（RSD＝ 蛋白原含量 6.5 mg/cm 、凝血酶含量 8.0 IU/cm 、胶原蛋
0.58%，n＝3），与预测 OD 值的相对误差为－0.87%，表 白含量5.6 mg/mL。经3次验证实验，所得OD值的RSD
明该配方稳定、可行。结果见表4。 为 0.58%，与预测 OD 值的相对误差为－0.87%，提示所
表4 DBT最优配方验证实验结果（n＝3） 得配方稳定、可行。此外值得注意的是，DBT 的主要有
[16]
效成分含量并不完全与其止血性能成正比 ，笔者猜想
实验号 黏合强度/gf 持黏力/min 吸水力 OD
1 322 33.0 13.2 0.727 5 这可能与不同有效成分含量配伍冻干所得成品的孔隙
2 318 33.2 13.1 0.722 0 率差异、微量成分发生生化反应而影响了产品性能等因
3 317 35.8 12.7 0.730 3 素有关。但上述推断尚需通过电镜扫描观察和药理、药
平均值 319 34.0 13.0 0.726 6
效学实验进一步论证。
3 讨论
综上所述，本文优化的DBT配方稳定、可行。
本课题组所制 DBT 是将极易发生凝血级联反应的
纤维蛋白原和凝血酶经过特殊工艺与胶原蛋白一起冻 参考文献
[ 1 ] 曾奇峰，陈谊. 纤维蛋白粘合剂的功能和对皮肤软组织
干成型而得，多以单片使用，叠加给药无法使其止血效
修复的影响[J]. 粘接，2023，50（3）：25-29.
能加倍，反而会改变其原有结构并增加机体降解负担，
ZENG Q F，CHEN Y. Hemostatic function of fibrin adhe‐
因此通过优化其配方以确定内在成分含量与其止血性
sive and its effect on skin and soft tissue repair[J]. Adhe‐
能的关系更为必要。为提高实验精确度并减少实验次
sion，2023，50（3）：25-29.
[15]
数 ，本文选择了Box-Behnken-响应面法对DBT的主要 [ 2 ] LITVINOV R I，PIETERS M，DE LANGE-LOOTS Z，et
成分含量进行了优化。 al. Fibrinogen and fibrin[J]. Subcell Biochem，2021，96：
本课题组在提取纯化胶原蛋白中间体溶液的过程 471-501.
中发现，当胶原蛋白分子量越大、浓度越高时，所得溶液 [ 3 ] STERGIOS K，FROUNTZAS M，PERGIALIOTIS V，et
的黏度越高，当胶原蛋白质量浓度为8、10 mg/mL时，中 al. The effect of TISSEEL on colorectal anastomosis hea-
®
· 2500 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 20 中国药房 2023年第34卷第20期