Page 35 - 《中国药房》2023年20期
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2.3 大鼠一般情况观察                                       3.2 安五脂素对各组大鼠肝指数的影响
              实验期间每天观察大鼠的一般情况，包括饮食、毛                             与正常组比较，模型组大鼠肝指数显著上升（P＜
          发光泽度、活动度、呼吸、体重、有无鼻出血、死亡等                           0.01）；与模型组比较，秋水仙碱片及安五脂素高、低剂量
          情况。                                                组大鼠肝指数均显著下降（P＜0.01）。结果见表1。
          2.4 大鼠肝指数的计算                                       表1 各组大鼠体重、肝脏质量和肝指数的检测结果（x±s）
              根据“2.2”项下各组大鼠体重和肝脏质量结果，计算                       组别            n      体重/g     肝脏质量/g    肝指数/%
          肝指数。肝指数＝大鼠肝脏质量（g）/大鼠体重（g）×                          正常组           9    417.20±9.61  8.53±0.76  2.04±0.14
          100%。                                               模型组           9    336.00±19.68 a  13.36±0.77 a  3.99±0.32 a
                                                              秋水仙碱片组        7    377.14±17.66 b  9.87±0.68 b  2.51±0.09 b
          2.5 大鼠血清中ALT、AST、SOD、MDA含量的测定                       安五脂素低剂量组      8    383.13±17.18 b  10.49±0.54 b  2.74±0.07 b
              取“2.2”项下血清，按照试剂盒说明书，采用比色法                       安五脂素高剂量组      7    401.14±8.51 b  9.09±0.50 b  2.26±0.08 b
          检测大鼠血清中ALT、AST、SOD、MDA的含量。                            a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
          2.6 大鼠肝组织病理形态学和肝纤维化程度的观察                           3.3 安五脂素对各组大鼠血清中 ALT、AST、SOD、
              取“2.2”项下固定于4%多聚甲醛溶液中的肝组织，                      MDA含量的影响
          经脱水、石蜡包埋、脱蜡、切片、烤片后进行组织学染色，                             与正常组比较，模型组大鼠血清中ALT、AST、MDA
          即HE染色和Masson染色，在光学显微镜下观察每组大                        含量均显著升高，SOD含量显著降低（P＜0.01）；与模型
          鼠肝纤维化的病理情况。从Masson染色图片里每组取                         组比较，秋水仙碱片组及安五脂素高、低剂量组大鼠血
          3张图片，利用Image J软件计算胶原容积分数。胶原容                       清中 ALT、AST、MDA 含量均显著降低，SOD 含量均显
          积分数（%）＝胶原阳性的蓝色面积/总面积×100%。                         著升高（P＜0.01）。结果见表2。
          2.7 大鼠肝组织中PI3K/Akt通路及凋亡相关蛋白表达
                                                             表2 安五脂素对各组大鼠ALT、AST、SOD、MDA含量
          水平的测定
                                                                  的影响（x±s）
              采用 Western blot 法进行测定。每组取 3 只冻存
                                                              组别          n   ALT/（U/L）  AST/（U/L）  SOD/（U/mL） MDA/（nmol/mL）
          于－80 ℃冰箱中的大鼠肝组织，经RIPA裂解液裂解后，                        正常组         9   11.41±1.99  16.32±2.19  414.68±4.67  3.55±0.44
          提取蛋白。采用 BCA 法进行定量后，对蛋白进行加热                          模型组         9   65.43±2.98 a  85.29±4.13 a  296.30±6.25 a  16.80±1.00 a
                                                              秋水仙碱片组      7   26.09±2.56 b  33.13±2.21 b  388.81±7.87 b  5.56±0.47 b
          变性处理，经制胶、电泳、转膜后，以 10% 牛血清白蛋白
                                                              安五脂素低剂量组    8   23.18±1.95 b  32.20±2.43 b  383.92±5.47 b  5.37±0.35 b
          封闭 1 h，洗膜，分别加入 PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax、            安五脂素高剂量组    7   20.52±1.90 b  23.52±2.26 b  397.13±4.87 b  4.07±0.64 b
          GAPDH一抗（稀释比例分别为1∶3 000、1∶30 000、1∶3 000、              a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
          1∶2 000、1∶3 000、1∶10 000），于 4 ℃孵育过夜；洗膜后，           3.4 安五脂素对各组大鼠肝组织病理形态和肝纤维化
          加入相应二抗（稀释比例为 1∶2 000），室温孵育 1 h 后，                  的影响
          用洗液漂洗3次，向PVDF膜上滴加化学发光试剂进行显                             HE染色结果（图1）显示，正常组大鼠肝组织结构完
          影、拍照。采用Gel-Pro Analyzer软件测定并分析目标蛋                  整，肝索排列成放射状，无纤维组织增生，无肝细胞脂肪
          白条带的灰度值，以目标蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带
                                                             变性及炎症细胞浸润；与正常组比较，模型组大鼠肝组
          的灰度值比值表示上述蛋白的表达水平。
                                                             织结构紊乱，有大量胶原纤维组织增生，肝索排列紊乱，
          2.8 统计学方法
                                                             汇管区域可见大量的炎症细胞浸润、肝细胞变性和坏
              采用 SPSS 26.0 软件进行统计分析。计量资料以
                                                             死；与模型组比较，秋水仙碱片组及安五脂素高、低剂量
          x±s表示，多组间差异比较采用单因素方差分析。方差
                                                             组的肝纤维化程度均有所减轻。Masson 染色结果（图
          齐性时，组间比较采用LSD检验；不满足方差齐性时，以
                                                             1）显示，正常组大鼠在肝组织汇管区域可见少量的蓝染
          Tamhane’s T2检验进行组间对比。检验水准α＝0.05。
                                                             胶原纤维；模型组大鼠肝组织中见大量蓝染胶原纤维，
          3 结果
                                                             纤维间隔变宽，纤维增生明显；与模型组比较，秋水仙碱
          3.1 各组大鼠的一般情况
                                                             片组及安五脂素高、低剂量组蓝染胶原纤维明显变细，
              正常组大鼠饮食正常，被毛浓密有光泽，活动有力，
                                                             肝纤维化程度均有不同程度的改善。正常组、模型组、
          呼吸正常，鼻部无出血，体重稳定增长；与正常组大鼠比
          较，模型组大鼠饮食量下降，被毛稀疏、蓬乱，反应迟钝，                         秋水仙碱片组和安五脂素高、低剂量组大鼠的胶原容积
          体重增长速率减慢或体重降低；其余各组与模型组比                            分数分别为（2.68±0.96）%、（38.96±4.40）%、（19.75±
          较，上述各种情况均有所改善。实验期间，正常组和模                           1.85）%、（13.84±1.59）%、（18.48±1.17）%。与正常组比
          型组大鼠无死亡，秋水仙碱片组、安五脂素高剂量组大                           较，模型组大鼠胶原容积分数显著升高（P＜0.01）；与模
          鼠各死亡3只，安五脂素低剂量组大鼠死亡2只，共死亡                          型组比较，秋水仙碱片组及安五脂素高、低剂量组大鼠
          8只大鼠。                                              胶原容积分数均显著降低（P＜0.01）。


          中国药房  2023年第34卷第20期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 20    · 2461 ·
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