Page 31 - 《中国药房》2023年20期

目的蛋白相对表达量 1.5 4 讨论
氧化应激在包括缺血/再灌注损伤、心脏肥大和心力
1.0
NFATc4 140 kDa 0.5 衰竭等在内的心脑血管疾病中起重要作用，过氧化物的

lamin B1 66 kDa a 水平是衡量氧化应激严重程度的重要因素，清除过氧化
[13]
0 物对改善心脑血管疾病具有重要意义 。ROS、MDA等
空白组 siNFATc4组 空白组 siNFATc4组 过氧化物是氧化应激导致心肌损伤的重要介质；相反，
A. NFATc4蛋白表达的电泳图 B. NFATc4蛋白表达的柱形图
（x±s，n＝3） 抗氧化酶 SOD、CAT 则可通过清除过氧化物、抑制脂质
a：与空白组比较P＜0.01。 过氧化反应等方式来缓解氧化应激、减少心肌损伤，是
图2 干扰NFATc4后细胞核蛋白NFATc4表达水平变化 部分药物改善心脑血管疾病的重要途径 。H2O2是氧
[14]
化应激反应的重要产物，常被用作体外氧化应激损伤的
3.4.2 细胞氧化应激指标的变化
与空白组比较，H2O2组细胞SOD、CAT水平均显著降 诱导剂，可激活线粒体凋亡途径而使存活细胞明显减
少 。本研究结果显示，在 H2O2的刺激下，H9c2 细胞的
[10]
低，MDA、ROS 水平均显著升高（P＜0.05），而 siNFATc4
MDA、ROS 水平均显著升高，SOD、CAT 水平则显著下
组细胞的上述指标均并无明显变化（P＞0.05）；与 H2O2
降；100、150 μmol/L 的芒果苷能显著增强细胞中 SOD、
组比较，H2O2+siNFATc4组细胞SOD、CAT水平均显著升
高 ，MDA、ROS 水 平 均 显 著 降 低（P＜0.05）。 结 果 CAT 活性，有效抑制 ROS 的生成并降低 MDA 水平；同
见表3。 时，100、150 μmol/L 的芒果苷还可使 H2O2诱导的 H9c2
细胞的相对存活率显著升高，提示芒果苷对H2O2诱导的
表3 干扰核蛋白 NFATc4 表达对细胞氧化应激指标的
氧化应激有一定的抑制作用，这与已有研究结果基本
影响（x±s，n＝3）
[15]
一致 。
组别 SOD/（U/mg） CAT/（U/mg） MDA/（nmol/mg） ROS
空白组 28.56±1.17 35.18±2.37 9.16±1.17 1.00±0.03 心力衰竭是多种心脏疾病的终末阶段，心肌细胞丢
H 2O 2组 13.24±0.71 a 13.29±1.16 a 23.45±3.48 a 4.54±0.27 a 失在促进心力衰竭发展中起重要作用，而氧化应激导致
siNFATc4组 27.39±1.23 33.26±2.89 22.52±2.19 1.00±0.06 的凋亡是造成心肌细胞丢失的重要原因 。研究指出，
[16]
H 2O 2+siNFATc4组 20.05±1.14 b 25.97±2.32 b 16.63±1.11 b 2.03±0.22 b
凋亡相关蛋白参与了不同途径介导的细胞凋亡过程：
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与H 2O 2组比较，P＜0.05。
Bcl-2 能与 Bax 和其他凋亡蛋白结合，Bcl-2 表达减少和
3.4.3 细胞凋亡相关蛋白表达的变化
Bax 表达增加是线粒体稳态失衡的主要标志，可反映出
与空白组比较，H2O2组细胞 Bcl-2 的相对表达量均 [17]
细胞凋亡水平的明显升高 ；通常情况下，Bcl-2/Bax 比
显著降低，Bax、cleaved caspase-3 的相对表达量均显著
例的下降可导致 caspase-3 活化，活化的 caspase-3（即
升高（P＜0.05），siNFATc4 组细胞的上述指标均并无明
cleaved caspase-3）进入细胞核后可激活核酸内切酶，导
显变化（P＞0.05）；与H2O2组比较，H2O2+siNFATc4组细胞 [18―19]
致 DNA 断裂，最终促进细胞凋亡发生 。为此，本研
Bcl-2 的相对表达量均显著升高，Bax、cleaved caspase-3
究检测了芒果苷对H2O2诱导的H9c2细胞中凋亡相关蛋
的 相 对 表 达 量 均 显 著 降 低（P＜0.05）。 结 果 见 图
白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表达的影响。结果显示，
3、表4。
在 H2O2刺激下，细胞中抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达显著下
调，而促凋亡蛋白 Bax 的表达则显著上调，cleaved cas‐
Bcl-2 28 kDa
pase-3 蛋白的表达亦显著升高；经 100、150 μmol/L 的芒
Bax 20 kDa 果苷干预后，上述蛋白的表达均被逆转，表明细胞凋亡
被芒果苷抑制。这提示芒果苷抗 H2O2致细胞氧化应激
cleaved caspase-3 17 kDa
损伤的作用可能是通过提高抗凋亡蛋白水平、降低促凋
亡蛋白水平，从而抑制细胞凋亡来实现的。
tubulin 55 kDa
NFATc4 是重要的转录因子，在被钙调磷酸酶激活
空白组 H 2 O 2 组 siNFATc4组 H 2 O 2 +siNFATc4组 后转位入核，参与促进肥大基因、炎症相关因子表达并
图3 干扰核蛋白 NFATc4 表达对细胞凋亡相关蛋白表
[20]
促进氧化应激、线粒体生成等多种生理病理过程 。研
达影响的电泳图
究指出，除调节肥大基因表达等经典功能外，NFATc4还
表4 干扰核蛋白 NFATc4 表达对细胞凋亡相关蛋白表 可通过多种途径参与凋亡过程，包括提高肿瘤坏死因子
达的影响（x±s，n＝3） α 水平、促进凋亡蛋白表达等 。本研究结果显示，在
[21]
组别 Bcl-2/tubulin Bax/tubulin cleaved caspase-3/tubulin H2O2作用下，核蛋白 NFATc4 的表达显著上调并伴有过
空白组 1.00±0.03 1.00±0.05 1.00±0.04 氧化物 ROS、MDA 水平的升高，抗氧化酶 SOD、CAT 水
H 2O 2组 0.47±0.07 a 2.87±0.37 a 2.65±0.29 a 平的下降和促凋亡蛋白 Bax 表达的增加；经 100、150
siNFATc4组 0.98±0.08 0.96±0.12 1.08±0.11
H 2O 2+siNFATc4组 0.77±1.14 b 1.35±0.17 b 1.75±0.18 b μmol/L 的芒果苷干预后，细胞中上述指标的分泌/表达
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与H 2O 2组比较，P＜0.05。 均被逆转。

中国药房 2023年第34卷第20期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 20 · 2457 ·