Page 40 - 《中国药房》2023年20期
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common peaks 8， 10， 12， 16， 18-19， 22-24 may be the characteristic components of anti-RSV of C. nudiflora.
          KEYWORDS     Callicarpa  nudiflora；  ethanol  extract；  respiratory  syncytial  virus；  fingerprint；  anti-virus；  spectrum-effect
          relationship


              裸 花 紫 珠 为 马 鞭 草 科 植 物 裸 花 紫 珠 Callicarpa        DMEM 培 养 液（ 批 号 812207）、乙 二 胺 四 乙 酸
          nudiflora Hook. et Arn. 的干燥叶 ，主要分布于我国海             （EDTA）-0.25% 胰酶（批号 2323363）、磷酸盐缓冲液
                                      [1]
          南、江西、广西等地，以海南五指山产者为上品 。该药                          （PBS，批 号 BYHC1713）、青 - 链 霉 素 双 抗（ 批 号
                                                  [2]
          具有收敛止血、消炎解毒的功效，可用于治疗细菌感染                            HYT11280746）均购自美国Gibco公司；MTT试剂（批号
                                                 [3]
          引起的急性传染性肺炎、消化道和呼吸道出血 。目前，                           1636C097）购自美国VWR公司；乙腈、乙酸均为色谱纯，
          研究者已从裸花紫珠中分离出 300 多种成分，主要为苯                         二甲基亚砜（DMSO）等其余试剂均为分析纯，水为超
          丙素类、挥发油类、黄酮类、倍半萜类、环烯醚萜类、三萜                          纯水。
                         [4]
          类、二萜类等成分 。                                          1.3 细胞与病毒
              呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）            人喉鳞癌细胞 Hep-2 和 RSV 均由山东中医药大学
          是有包膜的单股负链 RNA 病毒，属单股负链病毒目肺                          中医药抗病毒平台提供。
                                          [5]
          病毒科，其基因组可编码 11 种蛋白 。中药具有多成                          2 方法与结果
          分、多靶点的协同作用，可作用于多条通路，且不易产生                           2.1 裸花紫珠醇提物指纹图谱的建立
          耐药性，在治疗呼吸道病毒感染性疾病中具有广阔的应                            2.1.1 色谱条件
                [6]
          用前景 。已有文献报道，裸花紫珠乙酸乙酯部位是其                                以 Acquity  UPLC  BEH-C18 （100  mm×2.1  mm，1.7
          抗单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）的主要活性              μm）为色谱柱，以乙腈（B）-0.1% 乙酸溶液（C）为流动
          部位，可直接灭杀病毒，也可通过增强机体免疫来发挥                            相进行梯度洗脱（0～3 min，11%B；3～10 min，11%B→
                       [7]
          抗HSV的作用 ；裸花紫珠颗粒及裸花紫珠乙酸乙酯部                           14.5%B；10～20  min，14.5%B→18%B；20～22  min，
          位均具有较好的体外抗肠道病毒 71 型（human enterovi‐                 18%B→21%B；22～32 min，21%B→30%B；32～43 min，
          rus 71，EV71）的作用，治疗指数（therapeutic index，TI）分         30%B→95%B）；柱温为 35 ℃；流速为 0.20 mL/min；检测
          别为35.26、8.1 [8―9] 。                                 波长为350 nm；进样量为2 μL。
              谱效关系研究可从中药指纹图谱和药效学研究出                           2.1.2 裸花紫珠醇提物的制备
          发，阐释中药发挥药效的物质基础 。本课题组前期研                                取 4 批裸花紫珠药材，粉碎；称取上述粉末各 5 份，
                                        [10]
          究证实，裸花紫珠醇提物对RSV有较好的抑制作用。虽                           每份 40 g，分别加入 10%、30%、50%、70%、90% 乙醇 400
          已有研究建立了裸花紫珠的指纹图谱并报道了其抗病                             mL，超声提取 45 min×2 次，迅速抽滤，合并滤液，旋转
          毒作用   [7―9，11] ，但其抗RSV作用的物质基础尚不明确。基                 蒸发回收溶剂后冷冻干燥，即得裸花紫珠醇提物样品
          于此，本研究拟首先建立20批裸花紫珠醇提物的超高效                           S1～S20 （C1～C4批药材的上述 5 种醇提物分别对应 S1～
          液相色谱（UPLC）指纹图谱，对其抗 RSV 的谱效关系进                       S5、S6～S10、S11～S15、S16～S20，得率为10.52%～26.95%）。
          行研究，并建立数学模型表征裸花紫珠醇提物抗RSV的                           2.1.3 供试品溶液的制备
          药效成分，以期为裸花紫珠的进一步开发利用提供实验                                取上述 20 批裸花紫珠醇提物样品各 0.1 g，精密称
          依据。                                                 定，分别置于25 mL具塞容量瓶中，加50%甲醇溶解，超
          1 材料                                                声至完全溶解，放冷后以 50% 甲醇定容，摇匀，经 0.22
          1.1 主要仪器                                            µm微孔滤膜滤过，即得。
              本 研 究 所 用 仪 器 包 括 Waters Acquity  H-Class 型     2.1.4 方法学考察
          UPLC 系统（美国 Waters 公司）、Spectra Max M5 型酶标               （1）精密度考察：精密称取“2.1.3”项下供试品溶液
          仪（美国 Molecular Device 公司）、CKX41 型倒置显微镜             （编号S3 ），按“2.1.1”项下色谱条件重复进样6次。以13
         （日本Olympus公司）等。                                      号峰（保留时间适中、分离度良好且峰面积相对较大，下
          1.2 主要药品与试剂                                         同）为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间的 RSD 均
              4批裸花紫珠药材由江西普正药业股份有限公司提                          不 高 于 0.95%（n＝6），相 对 峰 面 积 的 RSD 均 不 高 于
          供，分别产自海南五指山（C1 ）、广西南宁（C2 ）、江西吉安                     2.86%（n＝6），说明方法精密度良好。
          锦源（C3 ）、江西吉安井冈山（C4 ），经江西普正药业股份                         （2）重复性考察：精密称取裸花紫珠醇提物样品（编
          有限公司吴永忠研究员鉴定均为马鞭草科植物裸花紫                             号S3 ），共6份，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按
          珠C. nudiflora Hook. et Arn.的干燥叶。                   “2.1.1”项下色谱条件进样分析。以13号峰为参照峰，计
              胎牛血清（批号 10270-106）购自美国 Clark 公司；                算得各共有峰相对保留时间的 RSD 均不高于 1.20%


          · 2466 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 20                            中国药房  2023年第34卷第20期
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