Page 34 - 《中国药房》2023年20期
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肝纤维化是多种致病因素（乙醇、药物、毒素等）导                         雅生物科技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色液（批号
          致的慢性肝损伤，以细胞外基质的异常沉积为主要特                             20220825）购自武汉呵尔医疗科技发展有限公司；Masson
          征，若患者得不到及时治疗，可能会引起肝硬化、肝癌等                           染色液（批号20221230）购自南京建成科技有限公司；蛋
                                 [1]
          疾病，严重时还会威胁生命 。当肝脏受到损伤时，肝细                           白酶抑制剂、BCA 蛋白定量试剂盒（批号分别为60345、
          胞发生凋亡，进而诱导肝星状细胞（hepatic stellate cells，             30324）均购自北京康为世纪生物科技有限公司；ECL高
          HSC）、巨噬细胞、库普弗细胞产生促纤维化因子来促进                          灵敏度化学发光检测试剂盒（货号WE0308）购自北京百
          HSC 的反式分化和肌成纤维细胞的激活，导致肝纤维                           奥莱博科技有限公司；兔源磷脂酰肌醇3-激酶（phospha‐
            [2]
          化 。因此，抑制肝细胞凋亡可减少HSC的激活，从而延                          tidylinositol 3-kinase，PI3K）抗体、蛋白激酶B（protein ki‐
          缓肝纤维化的进程。                                           nase B，Akt）抗体、磷酸化Akt（p-Akt）抗体、Bax抗体（批
              南五味子，也叫华中五味子，属木兰科，其药用部位                         号 分 别 为 GR3360941-5、1010423-7、GR3360948-18、
          为成熟的干燥果实，味酸，五行属木，入肝经，可滋肝阴、                          GR1008474-3）均购自英国Abcam公司；兔源 Bcl-2 抗体
                                                        [3]
          补肝体，具有收敛、益气生津、补肾安神、保肝等功效 。                         （货号 A-01209）购自上海齐天生物科技有限公司；鼠
          安五脂素是从南五味子中提取的一种木脂素类化合物，                            源多克隆抗体甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-
          具有保肝、抗氧化、抗炎、抑制肝细胞坏死等作用 。现                           phosphate dehydrogenase，GAPDH，货号ybs-2188R）购自
                                                    [4]
          代药理学研究表明，安五脂素具有多种药理活性，是一
                                                              上海研谨生物科技有限公司；辣根过氧化物酶标记的山
                                 [5]
          种潜在的肝损伤治疗药物 。前期研究发现，安五脂素
                                                              羊抗兔 IgG 二抗（货号 C86-SSA005）购自上海创赛科技
          可通过调节胱天蛋白酶3和B细胞淋巴瘤2（B-cell lym‐
                                                              有限公司；水为蒸馏水。
          phoma  2，Bcl-2）/Bcl-2 相 关 X 蛋 白（Bcl-2-associated  X
                                                              1.3 实验动物
                                         [6]
          protein，Bax）发挥抗细胞凋亡的作用 ，但其是否可通过
                                                                  SPF级健康雄性SD大鼠50只，体重180～220 g，由
          上述途径抑制肝细胞凋亡导致的肝纤维化尚不清楚。
                                                              北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号
          因此，本课题拟对安五脂素对肝纤维化的作用及机制进
                                                              为 SCXK（京）2019-0008。大鼠由贵州中医药大学实验
          行研究，旨在为该药的进一步开发提供依据。
                                                              动物中心饲养，自行进食和饮水。本研究通过贵州中医
          1 材料
                                                              药大学动物伦理委员会批准（批件号20220094）。
          1.1 主要仪器                                            2 方法
              本研究所用主要仪器包括 AUW-220D 型电子分析
                                                              2.1 动物分组及造模
          天平（日本岛津公司）、ZS-2 型板式酶标仪（北京新风机
                                                                  将 50 只雄性 SD 大鼠在实验前喂养 1 周后，随机分
          电技术公司）、TGL-20M型台式高速冷冻离心机（长沙湘
                                                              为正常组，模型组，秋水仙碱片组，安五脂素高、低剂量
          仪贝克仪器仪表有限公司）、Scientz-ⅡD 型超声波细胞
                                                              组，每组10只。除正常组大鼠腹腔注射等量橄榄油和生
          粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）、LIDE 200型
                                                              理盐水外，其余各组大鼠均腹腔注射50%CCl4橄榄油混
          扫描仪[佳能（中国）有限公司]、ST60-4型微孔板恒温振
                                                              合溶液（1.5 mL/kg），每周 2 次，持续 8 周，以复制肝纤维
          荡器（杭州米欧仪器有限公司）、Mini Trans-Blot 型蛋白
                                                              化大鼠模型 。造模结束后，分别抽取正常组和模型组1
                                                                        [7]
          转印系统（美国 Bio-Rad 公司）、4600SF 型凝胶成像仪
         （上海天能科技有限公司）、CX23型光学显微镜（济南博                          只大鼠处死，取肝脏进行 HE 病理检测，以 METAVIR 评
                                                                                      [8]
          坤科学仪器有限公司）等。                                        分为依据评估造模是否成功 。
          1.2 主要药品及试剂                                         2.2 动物给药及取材
              安五脂素对照品（批号 AFBH2603，纯度≥98%）购                        大鼠造模结束后，从第9周开始灌胃给药或蒸馏水，
          自成都埃法生物科技有限公司；秋水仙碱片（国药准字                            每组灌胃体积为10 mL/kg，每日1次，连续灌胃4周。其
          H53020166，批号 20211203，规格 0.5 mg）购自云南植物              中，正常组和模型组大鼠给予等量蒸馏水；安五脂素高、
                                                                                  [9]
          药业有限公司；CCl4 （批号20200522）购自天津市优谱化                    低剂量组参照文献方法 ，经等效剂量折算为低剂量组
          学试剂有限公司；橄榄油（批号20221001）购自上海嘉里                       大鼠给药 0.7 mg/kg，按照 4 倍剂量设置高剂量组，故予
          食品工业有限公司；丙氨酸转氨酶（alanine aminotrans‐                 安五脂素高剂量组2.8 mg/kg；秋水仙碱片组大鼠给药剂
                                                                          [10]
          ferase，ALT）、天 冬 氨 酸 转 氨 酶（aspartate  aminotrans-    量为0.1 mg/kg 。上述干预结束后，各组大鼠禁食不禁
          ferase，AST）试剂盒（批号分别为C009-2-1、C010-2-1）均             水 12 h，称重后，麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心后分离
          购自南京建成生物工程研究所有限公司；超氧化物歧化                            出血清，保存至－80 ℃冰箱；摘取新鲜肝脏，称定肝脏质
          酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒（货号 9054-89-1）        量后将新鲜的肝右叶组织固定于 4% 多聚甲醛溶液中，
          购自湖北日昇昌科技有限公司；丙二醛（malondialde‐                      用于后续的 HE 染色和 Masson 染色；其余肝组织冻存
          hyde，MDA）试剂盒（货号 XY-SHSJH-1017）购自上海烜                 于－80 ℃冰箱中，用于Western blot检测。


          · 2460 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 20                            中国药房  2023年第34卷第20期
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