Page 63 - 《中国药房》2023年18期

·药物与临床·

咖啡因及代谢产物的尿药浓度测定方法建立及临床应用
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2 #a
1， 2#b
陈相龙 1， 2＊ ，赵 杨 ，黄琼叶 ，徐铭卿 ，李 悦 ，陆 超 ，孙鲁宁 ，王永庆 （1.徐州医科大学药学院/江苏省
3
2
新药研究与临床药学重点实验室，江苏 徐州 210004；2.南京医科大学第一附属医院临床药理研究室，南京
210029；3.江苏省妇幼保健院儿科，南京 210036）
中图分类号 R969.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）18-2233-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.18.11
摘 要 目的 建立同时测定尿液中咖啡因及 3 种代谢产物茶碱、副黄嘌呤和可可碱浓度的方法并应用于临床。方法 以咖啡
因- C3-d3为内标，尿液样本经乙腈沉淀蛋白后，采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术测定咖啡因及3种代谢产物的
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浓度。以Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC为色谱柱，60 mmol/L乙酸铵溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，流速为0.5
®
mL/min，柱温为 38 ℃，进样量为 2 μL。采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子扫描，用于定量分析的离子对分别为
m/z 195.1→110.0（咖啡因）、m/z 181.1→124.0（茶碱）、m/z 181.1→124.0（副黄嘌呤）、m/z 181.1→138.0（可可碱）、m/z 198.1→140.1
（内标）。采用上述方法测定19例早产儿呼吸暂停（AOP）患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物的浓度。结果 咖啡因、茶碱、副黄嘌
呤、可可碱检测质量浓度的线性范围分别为0.200～200、0.050～50.0、0.050～50.0、0.100～100 μg/mL（r均大于0.990），定量下限分
别为 0.200、0.050、0.050、0.100 μg/mL；日内、日间精密度的 RSD 均不高于 10.37%，基质因子为 85.68%～109.90%，提取回收率为
93.53%～109.40%（RSD均小于15%），稳定性试验的RSD均小于15%。19例AOP患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物的质量浓度
分别为（27.346±7.951）、（0.351±0.223）、（0.428±0.395）、（0.472±0.374）μg/mL。结论 所建 HPLC-MS/MS 法操作简单、灵敏度
高，可用于AOP患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物浓度的测定。
关键词 咖啡因；代谢产物；早产儿呼吸暂停；尿药浓度；高效液相色谱-串联质谱法

Method establishment and clinical practice for concentration determination of caffeine and its metabolites
in urine
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CHEN Xianglong ，ZHAO Yang ，HUANG Qiongye ，XU Mingqing ，LI Yue ，LU Chao ，SUN Luning ，WANG
1， 2
2
Yongqing （1. School of Pharmacy/Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy，
1， 2
Xuzhou Medical University， Jiangsu Xuzhou 210004， China；2. Research Division of Clinical Pharmacology，
the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China；3. Dept. of Pediatrics，
Jiangsu Women and Children Health Hospital， Nanjing 210036， China）
ABSTRACT OBJECTIVE To establish a method for concentration determination of caffeine and its three metabolites，
theophylline， paraxanthine and theobromine in urine， and apply it in clinical practice. METHODS Using caffeine- C3-d3 as internal
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standard （IS）， and the urine samples were protein precipitated with acetonitrile； HPLC-MS/MS method was adopted to determine
the concentrations of caffeine and its three metabolites. The determination was performed on Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC
®
column with mobile phase consisting of 60 mmol/L ammonium acetate （A）-acetonitrile （B） （gradient elution） at the flow rate of
0.5 mL/min. The column temperature was set at 38 ℃， and the sample size was 2 μL. The electrospray ionization detection was
operated in a positive mode by multiple reaction monitoring. The detection ions for quantitative analysis were m/z 195.1→110.0 for
caffeine， m/z 181.1→124.0 for theophylline， m/z 181.1→124.0 for paraxanthine， m/z 181.1→138.0 for theobromine， and m/z 198.1→
140.1 for IS. The above method was used to determine the concentrations of caffeine and its three metabolites in the urine of 19
infants with apnea of prematurity （AOP）. RESULTS The linear ranges of mass concentration of caffeine， theophylline，
paraxanthin and theobromine were 0.200-200， 0.050-50.0，
Δ 基金项目 国家卫生健康委计划生育药具不良反应监测中心/江 0.050 0-50.0， and 0.100-100 μg/mL， respectively. The lower
苏 省 卫 生 健 康 发 展 研 究 中 心 开 放 课 题（No. JSHD2021004，No.
limits of quantification were 0.200， 0.050， 0.050 and 0.100
JSHD2021011）
μg/mL （r＞0.990）， respectively. RSDs of intra-day and intra-
＊第一作者 硕士研究生。研究方向：临床药学。电话：025-
68305001。E-mail：820695430@qq.com day precision were not above 10.37%， and matrix factors were
#a 通信作者 副主任药师，副教授，硕士生导师，博士。研究方向： 85.68%-109.90%； extraction recoveries were 93.53%-109.40%
体内药物分析、临床药理学。E-mail：sunluning0521@aliyun.com （RSD≤15%）， and RSDs of stability tests were all lower than
#b 通信作者 主任药师，教授，博士生导师，博士。研究方向：临床 15%. The concentrations of caffeine and its three metabolites
药学、临床药理学。电话：025-68307601。E-mail：wyqjsph@163.com in the urine of 19 cases were （27.346±7.951）， （0.351±

中国药房 2023年第34卷第18期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 18 · 2233 ·