Page 65 - 《中国药房》2023年18期
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度均为 0.050、0.100、0.300、1.00、3.00、10.0、30.0、45.0、 10.37%，RE为－5.00%～12.00%。结果见表3。
50.0 μg/mL的系列混合标准曲线溶液（以各成分质量浓 2.4.4 基质效应和提取回收率
度最低值为定量下限）。同法制得咖啡因质量浓度为 取 6 个不同来源的空白尿液样本，加入“2.2.2”项下
0.500、6.00、10.0、160 μg/mL，可可碱质量浓度为 0.250、 质控工作溶液，按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”项
3.00、5.00、80.0 μg/mL，茶碱、副黄嘌呤质量浓度均为 下条件进样测定，记录峰面积（A1 ）；取6个不同来源的空
0.125、1.50、2.50、40.0 μg/mL 的质控工作溶液。上述各 白尿液样本，加入乙腈沉淀后，再加入“2.2.2”项下质控
溶液均于－40 ℃保存备用。 工作液及内标溶液（取内标储备液，加入50%甲醇稀释，
2.2.3 内标工作溶液 得质量浓度为3 μg/mL），按“2.3”项下方法预处理后，再
精密吸取“2.2.1”项下内标储备液 50 μL，置于 1.5 按“2.1”项下条件进样测定，记录峰面积（A2 ）；取EP管数
mL EP管中，精密加入乙腈950 μL，涡旋混匀，得质量浓 支，加入“2.2.2”项下质控工作溶液，再加入初始比例的
度为 50.0 μg/mL 的内标溶液；精密吸取上述内标溶液， 流动相溶液，按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”项下
置于 100 mL 容量瓶中，加入乙腈定容，得质量浓度为 条件进样测定，记录峰面积（A3 ）。基质因子＝A2/A3×
50.0 ng/mL的内标工作溶液，于4 ℃保存备用。 100%，提取回收率＝A1/A2×100%。结果显示，咖啡因及
2.3 尿液样本预处理 3 种代谢产物的基质因子为 85.68%～109.90%，提取回
精密吸取尿液样本 10 μL，置于 1.5 mL EP 管中，加 收率为93.53%～109.40%，RSD均小于15%。
入“2.2.3”项下内标工作溶液 150 μL，涡旋 10 min；于 2.4.5 稳定性考察
4 ℃下，以 16 000 r/min 离心 15 min，取上清液 20 μL，加 按“2.2.2”项下方法分别制备低、高质量浓度的质控
入乙腈180 μL稀释，涡旋混匀后，取上清液进样测定。 样本溶液（咖啡因质量浓度分别为 0.500、160 μg/mL，
2.4 方法学考察 可可碱分别为 0.250、80.0 μg/mL，茶碱和副黄嘌呤均
[10]
参照 2020 年版《中国药典》（四部）通则“9012” 对 分别为 0.125、40.0 μg/mL），各质量浓度平行 3 份，分别
方法的专属性、标准曲线、精密度、准确度、基质效应、回 于室温下放置 10 h、进样器放置 20 h、长期冻存（－40、
收率、稳定性进行验证。 －80 ℃冻存45 d）和反复冻融3次（－40、－80 ℃）后，按
2.4.1 专属性考察 “2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下条件进样测定，考
精密吸取 6 个不同来源的空白尿液样本 10 μL，分 察上述不同条件下各样品的稳定性。结果显示，各样品
别加入乙腈 150 μL，按“2.3”项下方法预处理后，再按 在上述不同条件下的稳定性良好，RSD均小于15%。
“2.1”项下条件进样测定，记录空白尿液色谱图（图1A）。 2.5 临床应用
精密吸取“2.2.2”项下定量下限质量浓度溶液 5 μL，挥 2.5.1 纳入与排除标准
干，加入空白尿液 10 μL，涡旋混匀，分别加入乙腈 150 本研究的纳入标准为：（1）胎龄＜34 周；（2）伴有呼
μL，按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”项下条件进样 吸暂停，呼吸暂停时间＞20 s，或伴有心率下降（心率＜
测定，记录色谱图（图1B）。精密吸取“2.2.2”项下定量下 100次/min）或经皮血氧饱和度＜80%。
限质量浓度溶液 5 μL，挥干，加入患儿给药 0～4 h 后的 本 研 究 的 排 除 标 准 为 ：（1）体 温 ＞38.5 ℃ 或 ＜
尿液样本 10 μL，涡旋混匀，分别加入乙腈 150 μL，按 36.0 ℃；（2）临床怀疑或证实的败血症、中枢神经系统感
“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”项下条件进样测定， 染；（3）临床证实的缺氧缺血性脑病、癫痫；（4）临床怀疑
记录色谱图（图1C）。结果表明，尿液样本中内源性物质 或确诊的坏死性小肠结肠炎；（5）红细胞压积＞65%
不干扰各成分和内标的测定。 或＜40%；（6）血尿素氮＞20 mg/dL或尿量＜1 mL/（kg·h）；
2.4.2 标准曲线绘制 （7）心脏超声证实动脉导管未闭并伴有血流动力学显著
精密吸取“2.2.2”项下系列混合标准曲线溶液5 μL， 异常；（8）严重的先天性心脏病，如大动脉转位、左室发
挥干，加入空白尿液10 μL，涡旋混匀，按“2.3”项下方法 育不良综合征等；（9）颅内出血Ⅲ、Ⅳ级；（10）单纯阻塞
预处理后，再按“2.1”项下条件进样测定。以各待测成分 性呼吸暂停，如颈部过度屈曲、气道分泌物过多等；（11）
质量浓度为横坐标（X）、各待测成分与内标峰面积的 确诊的先天性气道发育畸形、先天性中枢神经系统发育
比值为纵坐标（Y），采用加权最小二乘法（加权因子为 异常等；（12）母亲有精神疾病或长期口服精神类药物；
2
1/X ）进行线性拟合。结果见表2。 （13）母亲妊娠期使用吗啡类药物或药物成瘾者；（14）父
2.4.3 精密度与准确度试验 母系近亲结婚或患儿有先天性遗传代谢性疾病等。
取“2.2.2”项下定量下限质量浓度溶液和质控工作 2.5.2 资料来源
溶液，各质量浓度平行5份，按“2.3”项下方法预处理后， 收集 2021 年 11 月－2022 年 3 月江苏省妇幼保健院
再按“2.1”项下条件进样测定，考察日内精密度；连续测 收治的 19 例 AOP 患儿，其中男性 9 例，女性 10 例，胎龄
定 3 d，考察日间精密度。将实测质量浓度与理论质量 （27.7±1.7）周，出生体重（1.08±0.34）kg。本研究方案
浓度进行比较，以相对误差（relative error，RE）考察准确 经医院医学伦理委员会批准，伦理号为 2021-SR-547。
度。结果显示，日内、日间精密度的 RSD 均不高于 所有患儿监护人均签署了知情同意书。
中国药房 2023年第34卷第18期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 18 · 2235 ·
