Page 64 - 《中国药房》2023年18期
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0.223）， （0.428±0.395）  and （0.472±0.374）  μg/mL，  respectively.  CONCLUSIONS  The  established  HPLC-MS/MS  method  is
          simple， sensitive and can be used for the determination of caffeine and its three metabolites in urine samples of AOP.
          KEYWORDS     caffeine； metabolites； apnea of prematurity； urinary drug concentration； HPLC-MS/MS



              早产儿呼吸暂停（apnea of prematurity，AOP）是指             Research Chemicals 公司；甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯；
          早产儿呼吸暂停时间超过20 s，或呼吸暂停持续时间不                          乙酸铵为分析纯；水为纯水。
                                                        [1]
          足 20 s 但伴有皮肤青紫、心动过缓、血氧下降等情况 ，                       1.3 空白尿液
          严重者会导致机体严重缺氧，从而引起并发症，甚至                                 健康成人尿液由本研究室提供，于－40 ℃冷冻
          死亡。                                                 保存。
              咖啡因是预防和治疗AOP的首选药物，与其他甲基                         2 方法与结果
          黄嘌呤类药物相比，咖啡因的半衰期更长，治疗范围更                            2.1 色谱与质谱条件
          广，成本效益更高       [2―3] 。咖啡因主要经肝脏代谢，可生成                2.1.1 色谱条件
                                                                                         ®
          茶碱、可可碱和副黄嘌呤3种主要代谢产物，其中茶碱具                               以 Waters ACQUITY UPLC  BEH HILIC（2.1 mm×
          有类似咖啡因的兴奋作用但相对较弱，可可碱和副黄嘌                            150 mm，1.7 μm）为色谱柱，60 mmol/L乙酸铵溶液（A）-
          呤具有轻微的中枢神经系统刺激作用，能促进呼吸                      [4―5] 。  乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～4.2 min，1%A；
          咖啡因的代谢和排泄很大程度取决于肝药酶和肾功能                             4.2～4.5 min，1%A→45%A；4.5～6.0 min，45%A；6.0～
          的发育程度     [4，6] 。由于早产儿体内肝药酶不足，肾功能尚                  6.2 min，45%A→1%A；6.2～7.5 min，1%A）；流速为 0.5
          未发育成熟，因此，咖啡因在早产儿体内的血浆清除率                            mL/min；洗脱时间为 7.5 min；柱温为 38 ℃；进样量为
          极低，半衰期可达101 h，易产生蓄积，而引发烦躁不安、                        2 μL。
          呕吐、心动过速、脑和肠系膜血流速度降低等不良反应，                           2.1.2 质谱条件
          还可增加脑出血和坏死性小肠结膜炎的发生风险                     [7―8] 。       采用电喷雾离子源，以多重反应监测模式进行正离
              目前，关于咖啡因治疗的最佳剂量和时机尚无标准                          子扫描；离子源电压为4 500 V；温度为650 ℃；雾化气压
                                           [7]
          方案，尤其是胎龄小于 29 周的早产儿 。因此，咖啡因                         为 45 psi；涡轮气压为 65 psi；气帘气压为 35 psi；碰撞气
          治疗AOP时，更加需要注意药物剂量和浓度监测。有研                           压为10 psi。用于定量分析的其他参数见表1。
          究表明，在早产儿的血液和尿液中，咖啡因的血药浓度                             表1 咖啡因及代谢产物、内标定量分析的其他参数
                               [9]
          和尿药浓度具有相关性 ，这提示可以通过检测早产儿                            待测成分   离子对m/z  去簇电压/V 射入电压/V 碰撞能量/eV 碰撞室射出电压/V 保留时间/min
          尿液中的咖啡因浓度来调整用药剂量，以避免血样采集                            咖啡因   195.1→110.0  89.0  9.0  32.0  20.0   2.16
          对早产儿造成的创伤。基于此，本研究采用高效液相色                            内标    198.1→140.1  77.0  9.0  27.0  25.0   2.16
                                                              茶碱    181.1→124.0  82.0  8.0  28.0  21.0   2.56
          谱-串联质谱（high performance liquid chromatography-      副黄嘌呤  181.1→124.0  74.0  6.0  29.0  19.0   2.78
          tandem mass，HPLC-MS/MS）技术测定了早产儿尿液中                  可可碱   181.1→138.0  96.0  9.0  24.0  26.0   2.51
          咖啡因及3种代谢产物（茶碱、可可碱、副黄嘌呤）的浓度                          2.2 溶液的制备
          并应用于临床，以分析早产儿体内咖啡因代谢的特点，                            2.2.1 对照品储备液及内标储备液
          旨在为咖啡因最佳剂量的探寻提供方法学基础，也为患                                精 密 称 取 咖 啡 因 对 照 品 10.20  mg、茶 碱 对 照 品
          儿的个体化治疗和临床安全用药提供依据。                                 10.00 mg、副黄嘌呤对照品 10.09 mg（均经纯度校正为
          1 材料                                                10.00 mg），分别置于 10 mL 容量瓶中，加入 50% 甲醇溶
          1.1 主要仪器                                            解并定容，得咖啡因、茶碱、副黄嘌呤质量浓度均为1.00
              本研究所用主要仪器包括1290 Infinity型高效液相                   mg/mL 的单一对照品储备液。精密称取可可碱对照品
          色谱仪（美国Agilent公司）、API 4000型三重四极杆液质                   10.00 mg（经纯度校正为 10.00 mg），置于 10 mL 容量瓶
          联用仪（美国应用生物系统公司）、BP 211D 型电子天                        中，加入二甲基亚砜溶解并定容，得可可碱质量浓度为
          平（德国 Sartorius 公司）、PCB-11 型涡旋混合仪（德国                 1.00 mg/mL 的对照品储备液。精密称取内标 10.00 mg
          Eppendorf公司）、Stratos型高速冷冻离心机[赛默飞世尔                 （经纯度校正为 10.00 mg），置于 10 mL 容量瓶中，加入
          科技（中国）有限公司]、Milli-Q Gradient 型纯水仪[密理                50%甲醇溶解并定容，得质量浓度为1.00 mg/mL的内标
          博（中国）有限公司]。                                         储备液。上述各储备液均于－40 ℃保存备用。
          1.2 主要药品与试剂                                         2.2.2 标准曲线溶液和质控工作溶液
              咖啡因对照品（批号1-SYC-135-1，纯度98%）、咖啡                      精密吸取“2.2.1”项下咖啡因、可可碱、茶碱和副黄
             13
          因- C3-d3（内标，批号1-NAZ-37-1，纯度98%）、可可碱对                嘌呤对照品储备液，加入 50% 甲醇稀释，得咖啡因质量
          照品（批号 1-PYL-44-1，纯度 98%）、茶碱对照品（批号                   浓度为 0.200、0.400、1.20、4.00、12.0、40.0、120、180、200
          ZZS-20-185-D6，纯度 100%）、副黄嘌呤对照品（批号                   μg/mL，可 可 碱 质 量 浓 度 为 0.100、0.200、0.600、2.00、
          2-AAH-100-1，纯 度 99.14%）均 购 自 加 拿 大 Toronto          6.00、20.0、60.0、90.0、100 μg/mL，茶碱、副黄嘌呤质量浓


          · 2234 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 18                            中国药房  2023年第34卷第18期
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