Page 92 - 《中国药房》2023年17期

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鼠模型 ：将糖尿病模型大鼠用普通饲料喂养4周后，按 白适量，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离
30 mg/kg 腹腔注射 3% 戊巴比妥钠，用恒温恒压电热烫 后转至聚偏二氟乙烯膜上，在室温条件下封闭2 h；加入
伤仪在压力为0.5 kg、温度为80 ℃、作用时间为4 s的设 HIF-1α、VEGF、MST1、p-MST1、LATS1、p-LATS1、p-YAP、
置下，在大鼠右后肢足背造成烫伤，深至皮下，观察烫伤 YAP、GAPDH 一抗（p-MST1 的稀释比例为 1∶2 000，其
处皮肤出现苍白、肿胀、破溃等症状；Control组同法进行 余一抗稀释比例均为1∶1 000），4 ℃孵育过夜，洗膜后加
烫伤处理。将建模成功的大鼠（共 60 只）随机分为 入二抗（稀释比例为1∶2 000），37 °C孵育90 min；洗膜后
Model 组，Andro 低、中、高剂量组和抑制剂组，每组 12 显影，以Image J软件分析蛋白条带的灰度值。以HIF-1α、
只。Andro 低、中、高剂量组分别灌胃 1、10、20 mg/kg 的 VEGF 蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带的灰度值比值表
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Andro溶液 和腹腔注射等体积的生理盐水，抑制剂组灌胃 示上述蛋白的表达水平，以 p-MST1 与 MST1、p-LATS1
20 mg/kg 的 Andro 溶液和腹腔注射 100 mg/kg 的维替泊 与 LATS1、p-YAP 与 YAP 蛋白条带的灰度值比值表示
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芬 ，每日1次，连续给药2周；Control组、Model组灌胃和 MST1、LATS1、YAP蛋白的磷酸化水平。
腹腔注射等体积的生理盐水。 2.8 统计与分析
2.2 大鼠创面愈合情况的检测 采用 SPSS 25.0 软件对数据进行统计分析，计量资
在造模及给药期间对大鼠创面边缘进行测量并拍 料以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间
照，采用 Image Pro Plush 6.0 图像分析系统对创面面积 两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
进行测定，并计算创面愈合率。创面愈合率（%）＝（原 3 结果
始创面面积－未愈合创面面积）/原始创面面积×100%。 3.1 Andro对大鼠创面愈合情况的影响
2.3 大鼠FBG及FINS含量的测定 Control组，Model组，Andro低、中、高剂量组及抑制
药物处理结束后，大鼠禁食不禁水12 h，剪尾取血， 剂组大鼠创面愈合率分别为（42.75±2.31）%、（19.65±
用卓越快速血糖仪测定大鼠的FBG。腹腔注射3%戊巴 1.24）% 、（23.68±1.37）% 、（27.83±1.51）% 、（34.26±
比妥钠麻醉大鼠后，腹主动脉取血，离心后得到血清， 2.04）%、（21.59±1.26）%。与 Control 组比较，Model 组
于－20 ℃保存。严格按照FINS ELISA试剂盒说明书测 大鼠创面愈合率显著降低（P＜0.05）；与 Model 组比较，
量大鼠的FINS含量。 Andro 低、中、高剂量组大鼠创面愈合率显著升高，且呈
2.4 大鼠创面组织损伤及毛细血管数的检测 剂量依赖性（P＜0.05）；与 Andro 高剂量组比较，抑制剂
药物处理结束后，腹腔注射 3% 戊巴比妥钠麻醉大 组大鼠创面愈合率显著降低（P＜0.05）。
鼠，分离大鼠创面组织及创面周边肉芽组织，部分创面 3.2 Andro对大鼠FBG及FINS含量的影响
及创面周边肉芽组织在 4% 多聚甲醛中过夜固定，经蔗 与 Control 组比较，Model 组大鼠 FBG、FINS 含量均
糖梯度脱水、石蜡包埋后切片（3 µm）。切片经二甲苯、 显著升高（P＜0.05）；与 Model 组比较，Andro 低、中、高
乙醇脱蜡和水化，以HE染色，然后在显微镜下观察染色 剂量组大鼠FBG、FINS含量均显著降低，且呈剂量依赖
结果并拍照，录入 MPIAS-400 彩色病理图文分析系统， 性（P＜0.05）；与 Andro 高剂量组比较，抑制剂组大鼠
观察毛细血管数。 FBG、FINS含量均显著升高（P＜0.05），结果见表1。
2.5 大鼠外周血内皮祖细胞数量的检测 表1 各组大鼠 FBG 及 FINS 含量的测定结果（x±s，
药物处理结束后，大鼠腹主动脉取血，用流式细胞 n＝12）
仪检测大鼠外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor 分组 FBG/（mmol/L） FINS/（mU/L）
cells，EPCs）数量，具体操作参考文献[14]。结果以EPCs Control组 4.67±0.64 15.37±1.12
Model组 19.38±1.36 a 37.52±2.65 a
数量占外周血单核细胞数量的百分比表示。
Andro低剂量组 16.52±1.21 b 32.10±2.14 b
2.6 大鼠血清生化指标的检测 Andro中剂量组 12.37±1.04 bc 25.45±1.48 bc
取“2.3”项下血清，用全自动生化分析仪检测各组大 Andro高剂量组 6.87±0.79 bcd 18.64±1.21 bcd
抑制剂组 17.65±1.34 e 30.25±2.08 e
鼠血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（tri‐
a：与Control组比较，P＜0.05；b：与Model组比较，P＜0.05；c：与
glyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipo‐ Andro低剂量组比较，P＜0.05；d：与Andro中剂量组比较，P＜0.05；e：
protein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low- 与Andro高剂量组比较，P＜0.05。
density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的含量。 3.3 Andro对大鼠创面组织损伤及毛细血管数的影响
2.7 大鼠创面组织中 HIF-1α、VEGF 及 Hippo-YAP 信 Control 组大鼠创面组织结构正常，细胞排列有序，
号通路相关蛋白表达的检测 毛细血管数较多；与 Control 组比较，Model 组大鼠创面
采用 Western blot 法进行检测。提取 6 只大鼠创面 组织结构不完整，有大量炎症细胞浸润，毛细血管数显
组织总蛋白，对蛋白进行定量后变性处理。取变性后的蛋 著减少（P＜0.05）；与 Model 组比较，Andro 低、中、高剂

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