Page 92 - 《中国药房》2023年17期
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          鼠模型 :将糖尿病模型大鼠用普通饲料喂养4周后,按                           白适量,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离
          30 mg/kg 腹腔注射 3% 戊巴比妥钠,用恒温恒压电热烫                     后转至聚偏二氟乙烯膜上,在室温条件下封闭2 h;加入
          伤仪在压力为0.5 kg、温度为80 ℃、作用时间为4 s的设                     HIF-1α、VEGF、MST1、p-MST1、LATS1、p-LATS1、p-YAP、
          置下,在大鼠右后肢足背造成烫伤,深至皮下,观察烫伤                           YAP、GAPDH 一抗(p-MST1 的稀释比例为 1∶2 000,其
          处皮肤出现苍白、肿胀、破溃等症状;Control组同法进行                       余一抗稀释比例均为1∶1 000),4 ℃孵育过夜,洗膜后加
          烫伤处理。将建模成功的大鼠(共 60 只)随机分为                           入二抗(稀释比例为1∶2 000),37 °C孵育90 min;洗膜后
          Model 组,Andro 低、中、高剂量组和抑制剂组,每组 12                   显影,以Image J软件分析蛋白条带的灰度值。以HIF-1α、
          只。Andro 低、中、高剂量组分别灌胃 1、10、20 mg/kg 的                VEGF 蛋白与内参蛋白(GAPDH)条带的灰度值比值表
                   [7]
          Andro溶液 和腹腔注射等体积的生理盐水,抑制剂组灌胃                        示上述蛋白的表达水平,以 p-MST1 与 MST1、p-LATS1
          20 mg/kg 的 Andro 溶液和腹腔注射 100 mg/kg 的维替泊             与 LATS1、p-YAP 与 YAP 蛋白条带的灰度值比值表示
            [13]
          芬 ,每日1次,连续给药2周;Control组、Model组灌胃和                   MST1、LATS1、YAP蛋白的磷酸化水平。
          腹腔注射等体积的生理盐水。                                       2.8 统计与分析
          2.2 大鼠创面愈合情况的检测                                         采用 SPSS 25.0 软件对数据进行统计分析,计量资
              在造模及给药期间对大鼠创面边缘进行测量并拍                           料以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析,组间
          照,采用 Image Pro Plush 6.0 图像分析系统对创面面积                两两比较采用SNK-q检验。检验水准α=0.05。
          进行测定,并计算创面愈合率。创面愈合率(%)=(原                           3 结果
          始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积×100%。                         3.1 Andro对大鼠创面愈合情况的影响
          2.3 大鼠FBG及FINS含量的测定                                     Control组,Model组,Andro低、中、高剂量组及抑制
              药物处理结束后,大鼠禁食不禁水12 h,剪尾取血,                       剂组大鼠创面愈合率分别为(42.75±2.31)%、(19.65±
          用卓越快速血糖仪测定大鼠的FBG。腹腔注射3%戊巴                           1.24)% 、(23.68±1.37)% 、(27.83±1.51)% 、(34.26±
          比妥钠麻醉大鼠后,腹主动脉取血,离心后得到血清,                            2.04)%、(21.59±1.26)%。与 Control 组比较,Model 组
          于-20 ℃保存。严格按照FINS ELISA试剂盒说明书测                      大鼠创面愈合率显著降低(P<0.05);与 Model 组比较,
          量大鼠的FINS含量。                                         Andro 低、中、高剂量组大鼠创面愈合率显著升高,且呈
          2.4 大鼠创面组织损伤及毛细血管数的检测                               剂量依赖性(P<0.05);与 Andro 高剂量组比较,抑制剂
              药物处理结束后,腹腔注射 3% 戊巴比妥钠麻醉大                        组大鼠创面愈合率显著降低(P<0.05)。
          鼠,分离大鼠创面组织及创面周边肉芽组织,部分创面                            3.2 Andro对大鼠FBG及FINS含量的影响
          及创面周边肉芽组织在 4% 多聚甲醛中过夜固定,经蔗                              与 Control 组比较,Model 组大鼠 FBG、FINS 含量均
          糖梯度脱水、石蜡包埋后切片(3 µm)。切片经二甲苯、                         显著升高(P<0.05);与 Model 组比较,Andro 低、中、高
          乙醇脱蜡和水化,以HE染色,然后在显微镜下观察染色                           剂量组大鼠FBG、FINS含量均显著降低,且呈剂量依赖
          结果并拍照,录入 MPIAS-400 彩色病理图文分析系统,                      性(P<0.05);与 Andro 高剂量组比较,抑制剂组大鼠
          观察毛细血管数。                                            FBG、FINS含量均显著升高(P<0.05),结果见表1。
          2.5 大鼠外周血内皮祖细胞数量的检测                                 表1 各组大鼠 FBG 及 FINS 含量的测定结果(x±s,
              药物处理结束后,大鼠腹主动脉取血,用流式细胞                               n=12)
          仪检测大鼠外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor                分组                   FBG/(mmol/L)     FINS/(mU/L)
          cells,EPCs)数量,具体操作参考文献[14]。结果以EPCs                  Control组              4.67±0.64       15.37±1.12
                                                              Model组               19.38±1.36 a     37.52±2.65 a
          数量占外周血单核细胞数量的百分比表示。
                                                              Andro低剂量组            16.52±1.21 b     32.10±2.14 b
          2.6 大鼠血清生化指标的检测                                     Andro中剂量组            12.37±1.04 bc    25.45±1.48 bc
              取“2.3”项下血清,用全自动生化分析仪检测各组大                       Andro高剂量组             6.87±0.79 bcd   18.64±1.21 bcd
                                                              抑制剂组                 17.65±1.34 e     30.25±2.08 e
          鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(tri‐
                                                                 a:与Control组比较,P<0.05;b:与Model组比较,P<0.05;c:与
          glyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipo‐          Andro低剂量组比较,P<0.05;d:与Andro中剂量组比较,P<0.05;e:
          protein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-           与Andro高剂量组比较,P<0.05。
          density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量。          3.3 Andro对大鼠创面组织损伤及毛细血管数的影响
          2.7 大鼠创面组织中 HIF-1α、VEGF 及 Hippo-YAP 信                   Control 组大鼠创面组织结构正常,细胞排列有序,
          号通路相关蛋白表达的检测                                        毛细血管数较多;与 Control 组比较,Model 组大鼠创面
              采用 Western blot 法进行检测。提取 6 只大鼠创面                组织结构不完整,有大量炎症细胞浸润,毛细血管数显
          组织总蛋白,对蛋白进行定量后变性处理。取变性后的蛋                           著减少(P<0.05);与 Model 组比较,Andro 低、中、高剂


          · 2130 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 17                            中国药房  2023年第34卷第17期
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