Page 91 - 《中国药房》2023年17期

detected by Western blot. RESULTS Compared with Control group， the wound healing rate， capillary number， the proportion of
EPCs， HDL-C content， as well as the protein expression levels of HIF-1α and VEGF and the phosphorylation levels of mammalian
Ste20-like kinase 1， large tumor suppressor gene 1 and YAP proteins were significantly reduced in the model group， while the
FBG， FINS levels and TC， TG and LDL-C contents were significantly increased （P＜0.05）. Compared with model group， the
above indexes were significantly reversed in Andro low-dose， medium-dose and high-dose group， in a dose-dependent manner （P＜
0.05）； verteporfin attenuated the above reversal effect of Andro （P＜0.05）. CONCLUSIONS Andro has the effects of lowering
blood glucose and blood lipids， promoting blood vessel formation and wound healing in rats with diabetic foot， and its mechanism
of action may be related to the activation of Hippo-YAP signaling pathway.
KEYWORDS andrographolide； diabetic foot； angiogenesis； Hippo-YAP signaling pathway

糖尿病足与糖尿病神经病变、外周血管疾病有关， 提取试剂盒（货号YT8951）购自北京伊塔生物科技有限
是 1 型和 2 型糖尿病最常见的慢性并发症之一，发病率 公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（货号 G1120-100）
有逐年增加的趋势；其特征是血管生成受损，如果治疗 购自北京索莱宝科技有限公司；空腹胰岛素（fasting in‐
不当，严重时会导致患者截肢或引发脓毒血症，严重影 sulin，FINS）ELISA 试剂盒（货号 FY-A014648）购自上海
响了患者的生活质量和生命健康 [1―3] 。促进血管生成及 富雨生物科技有限公司；兔源缺氧诱导因子1α（hypoxia-
[4]
创面愈合是治疗糖尿病足的有效方法之一 。因此，研 inducible factor 1α，HIF-1α）单 克 隆 抗 体（ 货 号
究糖尿病足的发病机制对于探索新的治疗药物具有重 ab179483）、兔源血管内皮生长因子（vascular endothelial
要意义。穿心莲内酯（andrographolide，Andro）具有抗 growth factor，VEGF）单克隆抗体（货号 ab32152）、兔源
[5]
炎、抗氧化和抗肿瘤等多种药理作用 。有研究发现， 哺乳动物Ste20样激酶1（mammalian sterile20-like kinase
Andro 可通过降低糖尿病小鼠空腹血糖（fasting blood 1，MST1）单克隆抗体（货号 ab245190）、兔源磷酸化
glucose，FBG）、甘油三酯、肾/体重比、血尿素氮、血清肌 MST1（p-MST1）单克隆抗体（货号 ab51134）、兔源大肿
酐、24 h 尿蛋白，抑制氧化应激产物活性氧产生和增加 瘤抑制基因1（large tumor suppressor gene1，LATS1）单克
促炎细胞因子，从而改善小鼠的糖尿病肾病 。Liang 隆抗体（货号 ab243656）、兔源磷酸化 LATS1（p-LATS1）
[6]
[7]
等 研究发现，Andro 通过减轻氧化应激、炎症和细胞凋 单克隆抗体（货号 ab111334）、兔源磷酸化 YAP（p-YAP）
亡能延缓糖尿病心肌病的进展。Hippo通路及其效应物 单克隆抗体（货号ab76252）、兔源YAP单克隆抗体（货号
Yes 相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）在调节器官 ab81183）、兔源三磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-
[8]
生长、组织修复和再生方面起着重要作用 。Hippo通路 phosphate dehydrogenase，GAPDH）多 克 隆 抗 体（货 号
的活化使 YAP 失活，从而抑制细胞存活、增殖和血管生 ab9485）均购自美国 Abcam 公司；辣根过氧化物酶标记
成，该通路和YAP是血管生成和伤口愈合的关键调节因 羊抗兔免疫球蛋白G二抗（货号XY0650）购自上海信裕
子 [9―10] ，但尚不清楚 Andro 能否通过调控 Hippo-YAP 信 生物科技有限公司。
号通路影响糖尿病足血管生成。因此，本研究主要探究 1.3 实验动物
Andro 对糖尿病足大鼠血管生成的影响以及其机制，以 SPF 级 SD 大鼠，5～7 周龄，雌雄各半，体重 180～
期为糖尿病足的治疗提供新的参考依据。 200 g，购自武汉云克隆动物有限公司，生产许可证编号
1 材料 为 SCXK（鄂）2018-0021。设置饲养温度为 22 ℃，湿度
1.1 主要仪器 为55%～60%，12 h光暗循环适应性喂养1周。
ACCU-CHEK Performa 型卓越快速血糖仪购自美 2 方法
国罗氏生物科技公司；3100型全自动生化分析仪购自日 2.1 动物建模、分组和给药
本日立有限公司；H1-16K 型冷冻高速离心机购自湖南 将 90 只大鼠随机分成 Control 组（12 只）和建模组
可成仪器设备有限公司；DM500型光学显微镜购自德国 （78 只），各组大鼠雌雄各半。Control 组用普通饲料喂
[11]
Leica仪器有限公司；FACSCalibur型流式细胞仪购自美 养。建模组参考相关文献 ，采用小剂量链脲佐菌素联
国BD公司。 合高脂高糖饮食复制2型糖尿病大鼠模型，高脂高糖饮
1.2 主要药品与试剂 食喂养4周后，按35 mg/kg一次性腹腔注射0.3%链脲佐
Andro标准品（纯度≥98%，货号B20207）、维替泊芬 菌素（Control 组按 10 mL/kg 注射等体积的柠檬酸-柠檬
（Hippo-YAP 信号通路特异性抑制剂，纯度为 97%，货号 酸钠缓冲液），注射后 3、7、10 d 取尾静脉血测量大鼠
S80258）均购自上海源叶生物科技有限公司；链脲佐菌 FBG，连续 3 次测得 FBG≥16.7 mmol/L，则为糖尿病模
素（货号 S0130）购自上海宝曼生物科技有限公司；蛋白 型造模成功。在此基础上，采用烫伤法建立糖尿病足大

中国药房 2023年第34卷第17期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 · 2129 ·