Page 38 - 《中国药房》2023年17期

receptor α （GRα） and GRβ in the ear tissue of mice was detected by tyramide signal amplification. The expressions of GRα
protein，GRβ protein，and protein kinase B （AKT）/ribosomal protein S6 kinase 1，S6K1 （S6K1） signaling pathway-related proteins
were determined by Western blot assay. RESULTS Compared with group B，the skin inflammation in the left ear of the mice was
significantly reduced in groups C，D and E，the serum levels of IgE and IL-4 were decreased significantly in groups D and E （P＜
0.05），while the number of GRα positive cells and GRα protein expression were increased significantly （P＜0.05）； the protein
levels of G protein inhibitory subunit 1 （Gαi1），Gαi3，phosphorylated S6K1 （p-S6K1） and phosphorylated AKT （p-AKT） were
decreased significantly （P＜0.05）； the number of GRβ positive cells and protein expression of GRβ was decreased significantly in
group E（P＜0.05）. Compared with group C，the skin inflammation in the left ear of the mice was almost clear away in group E，the
serum levels of IgE and IL-4 were decreased significantly （P＜0.05）； the number of GRα positive cells and GRα protein
expression were increased significantly in groups D and E （P＜0.05）； the protein levels of GRβ，Gαi1，p-S6K1 and p-AKT were all
decreased significantly in groups D and E（P＜0.05）； and protein level of Gαi3 was decreased significantly in group E （P＜0.05）.
CONCLUSIONS H. rhamnoides oil has an intervention effect on superantigen-induced glucocorticoid resistance of AD mice，which
may be exerted by inhibition of the Gαi1/3-induced AKT/S6K1 signaling pathway.
KEYWORDS Hippophae rhamnoides oil； superantigen； atopic dermatitis； glucocorticoid resistance； AKT/S6K1 signaling
pathway

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）是儿童常见的皮 利斯仪器系统有限公司），2800UV/VIS型紫外分光光度
肤炎症性疾病，病情迁延，容易复发。在全球范围内， 仪[尤尼柯（上海）仪器有限公司]，Biofuge primo R 型低
AD 的发病率均表现出逐年上升的趋势 [1―2] 。针对我国 温高速离心机（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
儿童和青少年群体进行的第3次全国范围内流行病学调 ESP200型电泳仪、4200SF型凝胶成像分析系统（上海天
查显示，AD患病率已从1998年的0.69%上升到2014年 能科技有限公司）。
[3]
的 12.94% 。多国治疗指南均推荐外用糖皮质激素 1.2 主要药品与试剂
（glucocorticoid，GC）为AD局部治疗的一线药物 [4―5] 。然 沙棘果油（批号GR-134-161229）购自辽宁东宁生物
而，一些患者在外用GC治疗时，随着治疗时间延长会出 药业有限公司，主要成分为脂肪酸（主要包括油酸
[6]
现激素抵抗，影响治疗效果 。因此，寻找安全有效的替 33.10%、棕榈油酸27.52%、软脂酸26.87%）、谷甾醇和β-
代或补充治疗方法，干预 AD 治疗时的激素抵抗具有重 胡萝卜素；2，4-二硝基氯苯（2，4-dinitrochlorobenzene，
要的公共卫生意义。超抗原（superantigen，SAg）是一类 DNCB，批号BCCC2721，纯度≥99%）购自美国Sigma公
来源于细菌或病毒的蛋白质，其不需要抗原呈递细胞加 司；地塞米松片（批号200311，规格0.75 mg/片）购自广东
[7]
工，可以直接高效地激活免疫细胞 。且有研究表明， 南国药业有限公司；兔源糖皮质激素受体 α（glucocorti‐
AD 患者皮损局部异常定植的金黄色葡萄球菌产生的 coid receptor alpha，GRα）抗体、兔源 GRβ 抗体、兔源 G
SAg参与了激素抵抗的发生 [8―9] 。 蛋白抑制性 α 亚单位 1（G protein inhibitory subunit 1，
中药沙棘是植物沙棘Hippophae rhamnoides L.的干 Gαi1）抗体、兔源 Gαi3 抗体、兔源核糖体蛋白 S6 激酶 1
燥成熟果实，自古就被蒙医、藏医及中医用于皮肤疾病 （ribosomal protein S6 kinase 1，S6K1）抗体、兔源磷酸化
的治疗。沙棘果油是从沙棘果实中提取的重要生物活 S6K1（phosphorylated S6K1，p-S6K1）抗体、兔源蛋白激
性物质，具有抗炎、抗氧化、免疫调节等作用 [10―11] 。本课 酶 B1/2（protein kinase B，AKT1/2）抗体、兔源磷酸化
题组前期研究发现，沙棘果油可通过丝裂原活化蛋白激 AKT（phosphorylated AKT，p-AKT）抗体、兔源甘油醛-3-
酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路调 磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，
节AD小鼠的免疫应答，改善Th1/Th2失衡，回调皮损局 GAPDH）抗体（批号分别为 ab2768、ab233165、ab3580、
部皮肤屏障功能的蛋白表达，修复皮肤屏障 。本研究 ab23315、ab32529、ab59208、ab300473、ab38449、ab8245）
[12]
拟在前期研究的基础上，利用 AD 模型深入分析沙棘果 均购自英国 Abcam 公司；FITC 标记的山羊抗兔免疫球
油对SAg诱导的小鼠AD激素抵抗的干预作用及相关机 蛋白G（immunoglobulin G，IgG）二抗（批号GB22303）购
制，为从天然产物中寻找 AD 激素抵抗的干预措施提供 自武汉塞尔维生物科技有限公司；IgE、白细胞介素4（in‐
参考。 terleukin 4，IL-4）酶联免疫吸附测定（enzyme-linked im‐
1 材料 munosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号分别为 SEA545
1.1 主要仪器 Mu、SEA077Mu）均购自武汉云克隆科技股份有限公司；
本研究所用仪器主要包括：ASP6025型全自动组织 BCA 蛋白浓度测定试剂盒、超敏 ECL 化学发光试剂盒
脱水机、EG1150H eagle 型包埋机、RM2235 型组织切片 （批号分别为 P0012S、P0018S）均购自上海碧云天生物
机（德国Leica公司），BSZY23S-Y型电子天平（北京赛多 技术有限公司。

· 2080 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 中国药房 2023年第34卷第17期