Page 33 - 《中国药房》2023年17期

关同仁牛黄清心丸的法定质控标准，已发表的文献仅有采 胆酸（hyocholic acid，HCA，批号 A1110816）对照品购自
[3]
用气相色谱法测定同仁牛黄清心丸中麝香酮的含量 ，而 美国Cayman公司（纯度不小于98%）。
能同时测定该药中多个胆汁酸成分的报道尚未见到。 15 批同仁牛黄清心丸由北京同仁堂科技发展股份
含牛黄中成药质量的决定性因素是牛黄及其代用 有限公司制药厂提供，批号分别为20010460、21010855、
[4]
品的质量 ，而对牛黄中的胆汁酸成分进行定量研究将 21010310、21010095、21010858、21010857、21010189、
成为提高含牛黄中成药质量标准和保障其药物稳定性 19010326、21010919、21010312、21011012、21010870、
[5]
的关键 。胆汁酸的种类、成分复杂，部分成分的分子 21010859、22010142、22010140（编号依次为 S1～S15）；
量、极性相近，甚至是同分异构体，不易分离，且部分胆 甲醇和甲酸为色谱纯或质谱纯，其余试剂均为分析纯。
汁酸含量极低，不易检测到，这增加了相关分析检测的 2 方法与结果
难度 [6―7] 。近年来，超高效液相色谱-串联质谱（UPLC- 2.1 分析条件
MS/MS）技术因融合了超高效液相色谱的分离能力和高 2.1.1 色谱条件
分辨质谱的鉴定能力而广泛用于中药复方成分的分析 色 谱 柱 为 Hypersil GOLD C18 （2.1 mm×100 mm，
[8]
与鉴定 。基于此，本研究建立了一种能同时测定同仁 1.9 µm）；流动相为甲醇（A）-0.1% 甲酸溶液（B），梯度洗
牛黄清心丸中 15 个胆汁酸成分含量的 UPLC-MS/MS 脱（0～0.5 min，20%A；0.5～1.5 min，20%A→70%A；
法，并采用该法对15批样品进行了测定，旨在为该药的 1.5～7 min，70%A→61%A；7～8 min，61%A；8～14
质量评价提供参考。 min，61%A→80%A；14～15 min，80%A→85%A；15～16
1 材料 min，85%A→90%A；16～17.5 min，90%A→20%A；17.5～
1.1 主要仪器 19 min，20%A）；柱温为 40 ℃；流速为 0.2 mL/min；进样
Dionex Uitimate 3000 型超高效液相色谱系统、四 量为2 µL。
极杆串联静电场轨道阱质谱仪（配备电喷雾离子源）、 2.1.2 质谱条件
Heraeus Fresco 17 型离心机均购自美国 Thermo Fisher 采用加热型电喷雾离子源、负离子监测模式（nega‐
Scientific公司；Milli-Q Direct 16型超纯水制备仪购自德 tive ion mode，Neg）；喷雾电压为 3.0 kV（－）；毛细管温
国Merck Millipore公司；CPA225D型十万分之一电子天 度为 325 ℃；辅助气温度为 350 ℃；鞘气流速为 45 arb；
平购自德国 Sartorius 公司；XM-400UHP 型超声波清洗 辅助气流速为10 arb；吹扫气体流速为1 arb；质谱测定数
仪购自小美超声仪器（昆山）有限公司。 据采用平行反应监测（parallel reaction monitoring，PRM）
1.2 主要药品与试剂 模式。各待测成分及内标的质谱优化参数见表 1；PRM
甘氨胆酸（glycocholic acid，GCA，批号Y08A9E57765）、 图见图1。
3-oxo-7α，12α-hydroxy-5β-cholanoic acid（3-OCA，批号 表1 各待测成分及内标的质谱优化参数
N07GY167164）、牛磺鹅脱氧胆酸（taurochenodeoxycholic 序号 待测成分 保留时间/min 母离子m/z 子离子m/z 碰撞能量/eV 电离模式
1 TCA 7.72 514.28 79.56 124 Neg
acid，TCDCA，批号 Y09S8K43540）、3α-羟基-7-氧代-5β-
2 7-ODCA 7.92 405.26 123.08 45 Neg
胆 烷 酸（3α -hydroxy-7-oxo-5β -cholanic acid，3α -OH-7- 3 12-DHCA 8.45 405.26 69.03 45 Neg
OCA，批号N30GB169735）、猪脱氧胆酸（hyodeoxycholic 4 GCA 9.85 464.30 74.02 41 Neg
5 3-OCA 11.11 405.26 271.10 45 Neg
acid，HOCA，批号S27M8I36899）、胆酸（cholic acid，CA，
6 TCDCA 12.33 498.28 79.95 100 Neg
批号T16J8Q28663）、甘氨鹅脱氧胆酸（glycochenodeoxy‐ 7 3α-OH-7-OCA 12.79 389.26 389.26 10 Neg
cholic acid，GCDCA，批号 Y29M9K57235）、甘氨脱氧胆 8 HCA 12.90 407.28 407.28 10 Neg
9 TDCA-NA 13.44 498.29 79.95 100 Neg
酸（glycodeoxycholic acid，GDCA，批号Y27M9E56969）、
10 HOCA 14.06 391.28 391.28 10 Neg
鹅 脱 氧 胆 酸（chenodeoxycholic acid，CDCA，批 号 11 CA 14.38 407.28 407.28 10 Neg
Z01011LA14）、脱氧胆酸（deoxycholic acid，DCA，批号 12 GCDCA 14.45 448.30 74.02 40 Neg
13 GDCA 15.14 448.30 74.02 40 Neg
S05N6I5476）、脱氢胆酸（dehydrocholic acid，DHCA，批
14 CDCA 17.04 391.28 391.28 10 Neg
号 S30J9I64022，内标）、7 -酮-3α，12α-羟基胆烷酸（7- 15 DCA 17.28 391.28 391.28 10 Neg
oxodeoxycholic acid，7-ODCA，批号 Z09M10J82521）、牛 16 DHCA（内标） 5.29 401.23 249.14 36 Neg
磺胆酸（taurocholic acid，TCA，批号 B15J11J118403）对 2.2 溶液的制备
照品均购自上海源叶生物科技有限公司（纯度均大于 2.2.1 混合对照品母液及内标溶液
95%）；12-脱氢胆酸（12-dehydrocholic acid，12-DHCA，批 精密称取上述除 DHCA 外的 15 种对照品各适量，
号 0000080453）、牛磺脱氧胆酸钠（taurodeoxycholic acid 加甲醇超声（功率100 W，频率40 kHz，下同）溶解，制成
sodium salt hydrate，TDCA-NA，批号 B26J9J53831）对照 质量浓度均为2 mg/mL的单一对照品母液。分别量取上
品均购自美国Sigma-Aldrich公司（纯度均大于95%）；猪 述各单一对照品母液，用甲醇稀释，得到TCA、7-ODCA、

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