Page 42 - 《中国药房》2023年15期

峰面积为纵坐标（Y）、各成分质量浓度的进样量（μg）为 157.5、210.0、420.0、525.0 μg/mL。以芦丁为参照物，分
横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程，具体见表1。 别计算连翘酯苷 A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖

表1 各成分线性关系考察结果 苷、连翘苷、连翘脂素的相对校正因子（fk/s ）。具体计算
成分 回归方程 线性范围/μg r 公式为fk/s＝CsAk/CkAs，其中Cs为参照物质量浓度，As为参
芦丁 Y＝619 169X+106.55 0.019～0.475 0.999 9 照物峰面积，Ck为待测成分质量浓度，Ak为待测成分峰
连翘酯苷A Y＝193 361X－48.637 0.021～0.525 0.999 9
（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 Y＝208 386X+75.509 0.023 6～0.590 0 0.999 9 面积。结果显示，连翘酯苷 A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡
连翘苷 Y＝108 431X－129.51 0.018 2～0.455 0 0.999 9 喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的平均相对校正因子为
连翘脂素 Y＝215 386X+86.502 0.012 7～0.317 5 0.999 9
0.311、0.338、0.174、0.350，RSD 分 别 为 2.03%、1.99%、
2.7 精密度试验 2.55%、2.36%（n＝7）。
精密吸取混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条 2.11.2 相对校正因子的重现性考察
件连续进样6次，记录峰面积。结果显示，芦丁、连翘酯 以芦丁为参照物，按“2.11.1”项下方法，考察不同色

苷A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘 谱柱条件对相对校正因子重现性的影响。结果显示，以
脂素峰面积的RSD分别为0.53%、0.71%、0.67%、0.51%、 ACQUITY UPLC HSS T3 C18（2.1 mm×100 mm，1.8
0.62%（n＝6），表明仪器精密度良好。 μm）、ACQUITY UPLC BEH C18 （2.1 mm×100 mm，1.7
2.8 稳定性试验 μm）、Zorbax SB-C18 （2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色谱柱
取同一批连翘花，按“2.2”项下方法制备供试品溶 为条件，所得连翘酯苷 A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡
液，于室温放置0、2、4、6、8、10、12 h时，按“2.1”项下色谱 萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的平均相对校正因子为
条件进样测定，记录峰面积。结果显示，芦丁、连翘酯苷 0.313、0.343、0.176、0.352，RSD 值分别为 2.00%、2.07%、
A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂 2.80%、2.39%（n＝3），表明不同色谱柱对相对校正因子
素峰面积的 RSD 分别为 0.80%、0.92%、1.01%、0.91%、 的影响较小。
0.97%（n＝7），表明供试品溶液在室温放置 12 h 内稳定 2.11.3 待测成分色谱峰的定位
性良好。 采用相对保留时间法 [9―10] ，以芦丁为基准峰，以各待
2.9 重复性试验 测成分色谱峰与芦丁色谱峰的保留时间比值来确定，考

取同一批连翘花6份，按“2.2”项下方法制备供试品 察 不 同 色 谱 柱 ACQUITY UPLC BEH C18、ACQUITY
溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，按外 UPLC HSS T3 C18、Zorbax SB-C18色谱柱，流动相 A 相比
标法计算芦丁、连翘酯苷 A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃 例变化±5%、B 相比例变化±0.05%，柱温变化±5 ℃、
葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的含量。结果显示，上述 5 检测波长变化±5 nm、流速变化±20%对相对保留时间
种成分的平均含量分别为 2.060、7.595、2.969、1.471、 的影响。结果显示，连翘酯苷 A、（+）-松脂素-4-O-β-D-
1.548 mg/g，RSD 分别为 1.26%、1.14%、1.13%、1.25%、 吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的相对保留时间分别
1.19%（n＝6），表明该方法重复性良好。 为1.073 0±0.012 9、1.110 0±0.013 4、1.395 0±0.013 9、
2.10 加样回收率试验 1.118 0±0.013 1，RSD 值 分 别 1.20%、1.21%、0.10%、
取同一批连翘花 6 份，每份约 0.1 g，分别精密加入 1.16%（n＝13），表明该方法可对上述 4 种成分进行
“2.3”项下各成分对照品储备液0.2、0.6、0.2、0.1、0.1 mL， 定位。
按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱 2.11.4 QAMS法与外标法测定结果的比较
条件进样测定，计算加样回收率。结果显示，各成分平 分别精密吸取芦丁对照品溶液和连翘花供试品溶
均 加 样 回 收 率 分 别 为 98.2%、97.3%、97.4%、96.8%、 液适量，按“2.1”项下方法进样测定，记录芦丁、连翘酯苷
97.4%，RSD 分别为 1.50%、1.62%、1.82%、1.66%、1.96% A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂

（n＝6）。 素峰面积，分别采用外标法和QAMS法计算5种成分的
2.11 QAMS法的建立及应用 含量，并采用相对偏差（相对偏差＝| QAMS法含量－外
2.11.1 相对校正因子的计算 标法含量 |/外标法含量×100%）考察 2 种方法所得结
[8]
采用多点校正法 进行计算。精密吸取“2.3”项下 果，具体见表2。由表2可知，两种方法计算所得各成分
混合对照品溶液，加甲醇稀释成不同质量浓度的系列对 的含量无明显差异（相对偏差＜1.0%），表明外标法和
照品溶液，其中，芦丁质量浓度分别为21.0、52.5、105.0、 QAMS法计算结果一致。

· 1828 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 中国药房 2023年第34卷第15期