Page 20 - 《中国药房》2023年15期
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2.2 样本采集                                            3 结果
              各组大鼠缺血2 h再灌注22 h后（栓塞2 h后进行再                     3.1 TMSC4 对 CIRI 模型大鼠脑指数及脑含水量的
          灌注，大鼠神经功能缺失明显，脑组织坏死程度适中，有                           影响
                      [13]
          利于后续研究 ），麻醉，腹主动脉取血，置于采血管中                               与假手术组比较，模型组大鼠脑指数和脑含水量均
          室温下静置 1 h 后，离心取上清液置于 －80 ℃保存备                       显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组大鼠脑
          用；同时分离各组大鼠缺血侧脑组织，进行脑指数及脑                            指数和脑含水量均显著降低（P＜0.05）；与 SC-Ag 组或
          含水量的测定。                                             TMP组比较，TMSC4中、高剂量组大鼠脑指数和脑含水
          2.3 大鼠脑指数及脑含水量的测定                                   量均显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
              各组取6只大鼠的缺血侧脑组织，去除嗅球、小脑和                         表1 各组大鼠脑指数、脑含水量及神经细胞凋亡率的
          低位脑干后，称定脑湿重，然后置于90 ℃条件下烘干至                               检测结果（x±s，n＝6）
          恒重，即得脑干重。脑指数＝脑湿重/体重×100，脑含水                         组别              脑指数        脑含水量/%      凋亡率/%
          量＝（脑湿重－脑干重）/脑湿重×100%。                               假手术组           0.38±0.02   70.58±6.25  5.28±0.71
          2.4 大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平的检测                    模型组            0.70±0.11 a  83.27±9.43 a  33.49±5.01 a
                                                              SC-Ag组         0.53±0.04 b  76.39±5.84 b  16.49±2.03 b
              采用 ELISA 法进行检测。取各组大鼠血清样品适                       TMP组           0.60±0.07 b  79.47±7.38 b  20.17±1.25 b
          量，按试剂盒说明书方法测定大鼠血清中 IL-1β、IL-6、                      TMSC4低剂量组      0.62±0.06 b  81.18±6.34 b  23.84±3.94 bc
          TNF-α水平。                                            TMSC4中剂量组      0.49±0.05 bcd  74.36±7.24 bcd  12.19±1.87 bcd
                                                              TMSC4高剂量组      0.41±0.03 bcd  71.90±5.09 bcd  8.60±1.63 bcd
          2.5 大鼠脑组织中 SOD、MDA、GSH-Px、CAT 水平的
                                                                 a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与SC-
          检测
                                                              Ag组比较，P＜0.05；d：与TMP组比较，P＜0.05。
              采用比色法进行检测。取各组剩余6只大鼠的脑组
                                                              3.2  TMSC4 对 CIRI 模 型 大 鼠 血 清 中 IL-1β、IL-6、
          织以冠状切面切成2片，取其中一片脑组织，加入适量生                           TNF-α水平的影响
          理盐水在冰浴条件下充分研磨，以 3 000 r/min 离心 10
                                                                  与假手术组比较，模型组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、
          min，收集上清液；取部分上清液（剩余部分进行Western
                                                              TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各给
          blot 实验）按试剂盒说明书方法测定大鼠脑组织中
                                                              药组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均显著降低
          SOD、MDA、GSH-Px、CAT水平。
                                                             （P＜0.05）；与SC-Ag组或TMP组比较，TMSC4中、高剂
          2.6 大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的检测
                                                              量组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均显著降低
              采用TUNEL法进行检测。取“2.5”项下剩余的一份
                                                             （P＜0.05）。结果见表2。
          冠状切片，按照 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒说明书方
                                                              表2 各组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平的检测
          法操作进行脑组织染色，采用荧光显微镜进行观察，棕
                                                                   结果（x±s，n＝12，pg/mL）
          黄色颗粒为阳性染色，表明神经细胞凋亡。每个图片随
                                                              组别              IL-1β       IL-6        TNF-α
          机选取3个高倍视野，计算凋亡率，凋亡率（%）＝阳性染
                                                              假手术组           35.58±6.91  18.69±4.63  55.63±7.08
          色细胞平均光密度值/总细胞平均光密度×100%。                            模型组           102.83±15.26 a  52.61±8.69 a  113.56±16.11 a
          2.7 大鼠脑组织中 Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3 蛋白           SC-Ag组         65.54±8.41 b  33.92±7.05 b  76.82±8.03 b
          表达水平的检测                                             TMP组           76.06±5.39 b  39.05±6.63 b  83.59±8.17 b
                                                              TMSC4低剂量组      88.95±9.72 b  40.27±7.05 b  87.36±7.81 b
              采用Western blot法进行检测。取适量“2.5”项下的                 TMSC4中剂量组      59.95±7.35 bcd  27.65±6.93 bcd  70.81±7.54 bcd
          脑组织匀浆，加入组织裂解液适量，然后采用BCA法测                           TMSC4高剂量组      50.47±8.61 bcd  22.73±4.97 bcd  63.72±6.59 bcd
          定蛋白浓度。将蛋白变性，然后进行十二烷基硫酸钠-                               a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与SC-
          聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离蛋白，转膜，封闭；分别加入                           Ag组比较，P＜0.05；d：与TMP组比较，P＜0.05。
          Bax（稀释度为 1∶1 000）、Bcl-2（稀释度为 1∶1 000）、              3.3 TMSC4 对 CIRI 模型大鼠脑组织中 SOD、MDA、
          cleaved-caspase-3（稀释度为 1∶500）、GAPDH（稀释度为            GSH-Px、CAT水平的影响
          1∶10 000）一抗，4 ℃孵育过夜；加入二抗（稀释度为 1∶                        与假手术组比较，模型组大鼠脑组织中SOD、GSH-
          15 000）孵育2 h；以ECL发光剂显影，采用凝胶成像系统                     Px、CAT 水平均显著降低（P＜0.05），MDA 水平显著升
          进行分析，并通过Image J软件分析蛋白灰度值，以目的                        高（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠脑组织中
          蛋白与内参蛋白的灰度值比值表示其表达水平。实验                             SOD、GSH-Px、CAT水平均显著升高（P＜0.05），MDA水
          重复3次。                                               平均显著降低（P＜0.05）；与 TMP 组比较，TMSC4 低剂
          2.8 统计学方法                                           量组大鼠脑组织中GSH-Px水平显著升高（P＜0.05）；与
                                                -
              采用 SPSS 26.0 软件进行分析。数据以 x±s 表示，                 SC-Ag组或TMP组比较，TMSC4中、高剂量组大鼠脑组
          多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用                             织中SOD、GSH-Px、CAT水平均显著升高，MDA水平均
          LSD-t检验。检验水准α＝0.05。                                 显著降低（P＜0.05）。结果见表3。


          · 1806 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 15                            中国药房  2023年第34卷第15期
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