Page 19 - 《中国药房》2023年15期
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脑卒中可分为出血性脑卒中和缺血性脑卒中（即                         （上海赞维衡器有限公司），JP-NCS3000W型超声波细胞
         “脑梗死”），后者约占 80%～85%，其已成为威胁人类生                       破碎仪（上海继谱电子科技有限公司）。
          命的重大疾病 。缺血性脑卒中发病机制复杂，涉及氧                           1.2 主要药品及试剂
                      [1]
          化应激、谷氨酸释放、细胞凋亡、能量代谢障碍和钙离子                              TMSC4、SC-Ag 由本实验室自制 （经高效液相色
                                                                                              [8]
                [2]
          超载等 。当脑血管出现血栓时，正常的循环受阻，导致                          谱法检测，纯度均大于 96%）；TMP（批号 11032-118，纯
          缺血性脑卒中产生。因此，治疗缺血性脑卒中的首要任                           度≥99％）购于深圳市丽晶生化科技有限公司；过氧化
          务就是溶栓，但当脑血流量供应恢复时，反而会引起脑                           氢酶（catalase，CAT）试剂盒（批号 20190415）、超氧化物
          缺血再灌注损伤，从而产生炎症和大量活性氧，进而导                           歧 化 酶（superoxide  dismutase，SOD）试 剂 盒（批 号
          致神经元损伤，加重脑梗死 。                                     20190321）、丙二醛（malondialdehyde ，MDA）试剂盒（批
                                 [3]
              川芎嗪（tertramethylpyrazine，TMP）是伞形科植物            号 20190315）、谷胱甘肽过氧化氢酶（glutathione peroxi‐
          川芎 Ligusticum chuanxiong Hort. 干燥根茎中的生物碱           dase，GSH-Px）试剂盒（批号 20190218）均购于南京建成
          单体（结构见图 1A），具有改善脑缺血、抗氧化的作用，                        生物工程研究所；细胞裂解液（批号 20190723）、BCA 蛋
          但存在生物利用度低、半衰期短、代谢快等缺点，因此，                          白试剂盒（批号 20190618）均购于上海炎熙生物科技有
          其临床应用受到限制         [4―5] 。灯盏乙素（scutellarin，SC）是     限公司；兔源B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）
          菊科植物短葶飞蓬 Erigeron breviscapus （Vant.）Hand-         抗体、兔源Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，
          Mazz. 干燥全草的主要活性成分，临床主要用于治疗缺                        Bax）抗体以及肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，
          血性脑卒中、冠心病以及心绞痛等，其被小肠吸收的形                           TNF-α）、白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6 的
          式为灯盏乙素苷元（SC-Ag，其结构见图 1B），但 SC 和                    酶 联 免 疫 吸 附 测 定（ELISA）试 剂 盒（批 号 分 别 为
          SC-Ag 均存在稳定性差、水溶性差、口服生物利用度低                        20190619、20190412、20190109、20190115、20190202）均
          等问题 。孪药是将两个相同或不同的药物经共价键连                           购于北京索莱宝科技有限公司；兔源 GAPDH 单克隆抗
                [6]
          接缀合生成的新杂交分子，在体内代谢生成两种以上具                           体（批号00105831）购于武汉三鹰生物技术有限公司；兔
          协同作用的药物，增强活性或产生新的药理活性。本课
                                                             源活化型胱天蛋白酶 3（cleaved-caspase-3）抗体（批号
          题组前期研究中以天然氨基酸为链接子，设计合成得到
                                                             ab1908）购于美国 Abcam 公司；辣根过氧化物酶标记的
          一系列TMP/SC-Ag孪药，且与TMP或SC-Ag相比，上述                    山羊抗兔二抗（批号20000576）购于美国CST公司。
          系列孪药均表现出良好的抗氧化损伤作用及抗凝血活
                                                             1.3 实验动物
          性 [7―8] ，其中孪药化合物4（TMSC4，结构见图1C）能改善
                                                                 实验动物为健康雄性 SD 大鼠，共 105 只，体重
          中 动 脉 阻 断 局 灶 性 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤（cerebral
                                                            （230±20） g，由贵州医科大学实验动物中心提供，动物
          ischemia-reperfusion injury，CIRI）模型大鼠的行为学特
                                                             生产许可证号为 SCXK（黔）2018-0001。本研究经贵州
                             [8]
          征、降低脑梗死体积比 ，但其神经保护作用及机制尚不
                                                             医科大学动物实验伦理委员会批准（批准号1900112）。
          清楚。因此，本文进一步研究孪药 TMSC4 对 CIRI 模型                    2 方法
          大鼠的神经保护作用及机制，以期为缺血性脑卒中治疗
                                                             2.1 分组、给药及造模
          药物的开发提供参考。
                                                                 将105只大鼠随机分为假手术组、模型组、SC-Ag组
                                                            （0.7 mmol/kg）、TMP 组（0.7 mmol/kg）和 TMSC4 低、中、
                                                             高剂量组（0.35、0.7、1.4 mmol/kg），每组 15 只。假手术
                                                             组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，其余各组大鼠灌
                                                             胃相应药物，各组剂量均参考文献[7－9]设置，每天 1
                                                             次，连续 14 d。末次给药 30 min 后，除假手术组外，其余
          A. TMP      B. SC-Ag            C. TMSC4           各组均采用线栓法使大鼠脑中动脉栓塞以建立 CIRI 大
                 图1 TMP、SC-Ag、TMSC4的结构式                      鼠模型   [10―11] 。按照 Zea Longa 5 级 4 分制法的评分标准

          1 材料                                               对大鼠神经功能进行评分：无明显神经症状，两前肢均
          1.1 主要仪器                                           显示正常力量，可伸直，计0分；不能完全伸展患侧前爪，
              本研究所用主要仪器有ReadMax1500型酶标仪（上                    计1分；向患侧旋转，但在休息时正常，计2分；行走时向
          海闪谱生物科技公司），DYY-6C 型电泳仪系统（北京六                       患侧倾倒，计 3 分；不能自行行走或意识丧失，计 4 分。
                                          +
          一生物科技有限公司），ChemiDocXRS 型凝胶成像系统                     当造模大鼠神经功能评分为 2～3 分，则表明造模成
                                                               [12]
         （美国Thermo Fisher Scientific公司），TGL16M型离心机           功 。本研究造模成功率为 80%（即造模的组别分别造
         （湖南凯达科学仪器有限公司），ZA305AS 型分析天平                        模成功12只）。


          中国药房  2023年第34卷第15期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 15    · 1805 ·
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