Page 59 - 《中国药房》2023年14期
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Parkin                                   51 kDa   上述突触相关蛋白的表达水平均显著升高，提示癫痫清
            LC3B                                    17 kDa   颗粒可上调 AD 小鼠脑组织中突触相关蛋白的表达，从
           PINK1                                    63 kDa   而促进其突触发育、改善其学习记忆障碍。
             p62                                    55 kDa       AD患者脑组织中的tau蛋白总量多于正常人，且可
           β-actin                                  42 kDa   发生过度磷酸化。当 tau 蛋白发生过度磷酸化时，其与
                 对照组       模型组    癫痫清颗粒组   盐酸多奈哌齐组           微管结合的能力减弱，从而导致神经细胞轴突运输受
                            A.自噬相关蛋白
                                                             损，突触传递缺陷和功能障碍，神经细胞死亡，使得患者
            SYP                                     48 kDa
                                                                         [1]
                                                             认知能力下降 。有研究指出，tau 蛋白与 AD 患者认知
           PSD-95                                   95 kDa
                                                                                    [12]
                                                             功能障碍的关联较为密切 。因此，tau 蛋白常作为 AD
           GAP-43                                   43 kDa
                                                             的治疗靶点和观测指标。迄今为止，与AD有关的tau蛋
           β-actin                                  42 kDa
                                                             白 Ser 和苏氨酸（threonine，Thr）磷酸化位点已超过 30
                 对照组       模型组    癫痫清颗粒组   盐酸多奈哌齐组
                            B.突触相关蛋白                         个，其中Ser404、Ser181、Thr231、Ser235、Ser199、Ser202、
           Ser199                                   52 kDa                                       [13]
                                                             Thr205等均可作为抗AD研究的潜在靶点 。有研究指
           Ser202                                   52 kDa
                                                             出，AT8 可识别 Ser202 和 Thr205 上的双重磷酸化表位，
            tau-5                                   52 kDa
                                                             该表位不受Ser199上第3个磷酸基团的影响；同时，AT8
                  对照组      模型组     癫痫清颗粒组  盐酸多奈哌齐组
                            C. Ser202和Ser199                 对包含人 tau 序列的 Ser199/202 或 Ser205/208 的 2 个双
                                                                                 [14]
         图5 各组小鼠脑组织中 PINK1、Parkin、LC3B、p62、                  磷酸基序具有交叉影响 ，故本研究选取AT8和Ser199、
               SYP、PSD-45、GAP-43 和 Ser199、Ser202 蛋白表         Ser202 为指标，评价小鼠体内 tau 蛋白的磷酸化水平。
               达电泳图                                          结果显示，与对照组比较，P301S小鼠脑组织中AT8蛋白
          4 讨论                                               的表达水平和Ser199、Ser202蛋白的磷酸化水平均显著
                                                             升高；经癫痫清颗粒干预后，小鼠脑组织中上述蛋白的
              AD的主要临床表现为学习记忆能力下降和认知功
                                                             表达/磷酸化水平均显著降低。
          能障碍。Y迷宫是评价小鼠短期记忆能力的一种方式，
          该实验利用了啮齿类动物对未探访区域的好奇心，同时                               有证据表明，线粒体损伤可诱导tau蛋白磷酸化，磷
          避免了其他实验奖惩制度对小鼠空间识别记忆的影响。                           酸化的tau蛋白与线粒体外膜的电压依赖型阴离子通道
          本研究结果显示，与对照组比较，P301S小鼠的自发交替                        蛋白1相互作用，导致线粒体门控功能障碍，从而加重线
                                                                     [3]
          反应率显著降低，说明其出现了记忆损伤，空间识别能                           粒体损伤 ，而适度的线粒体自噬可对神经细胞发挥保
                                                                   [15]
          力有所下降；经癫痫清颗粒干预后，P301S小鼠的空间识                        护作用 。有研究指出，LC3B和p62蛋白的表达水平可
                                                                           [16]
          别记忆能力明显增强。本研究采用 Morris 水迷宫实验                       反映自噬的高低 。PINK1/Parkin作为经典的线粒体自
          对P301S小鼠的长期空间学习记忆能力进行了评价，结                         噬通路参与了AD患者和不同AD细胞/动物模型的线粒
                                                                       [17]
          果显示，癫痫清颗粒可缩短 P301S 小鼠的游泳潜伏期，                       体自噬过程 。当线粒体受损时，PINK1 可通过自磷酸
          增加其穿越平台的次数，且不影响小鼠的游泳速度。                            化激活，并募集Parkin至线粒体外膜，招募泛素蛋白p62
              神经细胞的线粒体功能障碍可引起细胞内三磷酸                          启动泛素系统；p62与LC3B结合后形成自噬小体，随后
          腺苷供应不足和活性氧释放增加，从而造成神经细胞损                           溶酶体包裹自噬小体形成自噬-溶酶体，最终被溶酶体
                                                                                [18]
            [11]
          伤 。脑内神经细胞功能状况可通过HE染色法和尼氏                           降解，p62也随之降解 。有报告指出，激活线粒体自噬
          染色法评估：当神经细胞功能受损时，神经细胞数量减                           可改善 PINK1/Parkin 缺失导致的 AD 小鼠认知功能障
                                                                                             [19]
          少，细胞膜边缘破损，细胞核固缩，尼氏体减少或消失 。                         碍，从而预防、缓解 AD 的发生、发展 。本研究结果表
                                                      [11]
          本研究结果显示，癫痫清颗粒可使P301S小鼠脑组织中                         明，P301S 小鼠脑组织中 PINK1、Parkin、LC3B 蛋白的表
          神经细胞结构得以改善，尼氏体增多，提示该药对P301S                        达较对照组显著下调，Ser199、Ser202蛋白磷酸化水平和
          小鼠脑组织受损神经细胞有一定的修复作用。由于神                            AT8、p62蛋白的表达水平均显著升高，提示自噬溶酶体
          经细胞损伤和突触丢失与AD患者认知功能损害密切相                           系统受阻，从而可能导致自噬受到抑制，受损线粒体无
            [11]
          关 ，因此本研究检测了 P301S 小鼠脑组织中突触相关                       法得以清除，进一步促使 tau 蛋白过度磷酸化。经癫痫
          蛋白的表达情况。结果显示，与对照组比较，模型组小                           清颗粒干预后，P301S小鼠脑组织中PINK1、Parkin蛋白
          鼠脑组织中突触相关蛋白SYP、GAP-43、PSD-95的表达                    的表达均显著上调，LC3B-p62自噬小体被激活，tau蛋白
          水平均显著降低；经癫痫清颗粒干预后，小鼠脑组织中                           的磷酸化水平显著降低。


          中国药房  2023年第34卷第14期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 14    · 1717 ·
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