Page 62 - 《中国药房》2023年14期

related to down-regulation of the expressions of inflammatory pathway-related proteins iNOS， COX-2， Myd88 and PKC， and
reduction of inflammatory factors release.
KEYWORDS total flavonoids of Bidens pilosa L.； lipopolysaccharide； neuroinflammation； inflammatory factors

神经炎症是特指发生于中枢系统内的炎症反应，是 1.2 主要药品与试剂
神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森综合征、亨廷 TFB[ 黄 酮 含 量 为 52.72%（以 芦 丁 计），货 号
顿舞蹈症、多发性硬化症以及肌萎缩侧索硬化症等发病 20190604]由钦州医药有限责任公司提供；LPS（货号
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机制的关键因素 。小胶质细胞是中枢神经系统中的常 L4391）购 自 美 国 Sigma 公 司 ；IL-10、TNF- α、IL-6 和
驻免疫细胞，在机体的防御和组织修复中起着关键作 IL-1β 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为
用，一旦中枢神经系统受病原体刺激而发生轻微病理变 E-EL-M0046c、E-EL-M0049c、E-EL-M0044c、E-EL-M0037c）
化即可激活小胶质细胞 。活化的小胶质细胞经聚集、 均购自伊莱瑞特（武汉）生物技术有限公司；NO 测定试
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增殖、迁移后吞噬病原体，向 T 细胞呈递抗原，通过激 剂盒（货号 A013-2）购自南京建成生物工程研究所有限
活多种炎症通路，释放促炎因子诱导型一氧化氮合酶 公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号P0010）购自上海
（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、环氧合酶 2 碧云天生物技术有限公司；兔 iNOS 多克隆抗体（货号
（cyclooxygenase-2，COX-2）、白细胞介素1β（interleukin-1β， Bs-2072r）购自北京博奥森生物技术有限公司；小鼠β-肌
IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α， 动蛋白（β-actin）单克隆抗体（货号66009-1-ig）、兔COX-2
TNF-α）、一氧化氮（nitric oxide，NO）和神经毒性分子， 多克隆抗体（货号 12375-1-ap）、鼠髓样分化因子 88
引发神经炎症，促进神经元损伤和细胞死亡 。因此，抑 （myeloid differentiation factor 88，Myd88）多 克 隆 抗 体
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制小胶质细胞活化引起的神经炎症反应对临床治疗中 （货号 67969-1-ig）和兔 PKC 多克隆抗体（货号 20877-1-
枢神经系统疾病具有重要意义。 ap）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；辣根过氧化物
鬼针草又名鬼骨针、婆婆针，为菊科一年生草本植 酶标记的山羊抗小鼠、山羊抗兔二抗（货号分别为
物，全草均可用药，药用历史悠久，始载于《本草拾遗》； BA1051、BA1054）均购自武汉博士德生物工程有限
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其味苦，性平，具有清热解毒、活血散瘀、消肿之功效 。 公司。
近年来研究证实鬼针草具有抗炎、抗氧化、抗纤维化、抗 1.3 实验动物
肿瘤、降血压、调节免疫、抗糖尿病及抗血小板聚集等 50 只 SPF 级健康雄性 C57BL/6 小鼠，体重为 22～
药理活性 [5―6] 。鬼针草总黄酮（total flavonoids of Bidens 25 g，购自辽宁长生生物技术有限公司，生产许可证号为
pilosa L.，TFB）是鬼针草的主要活性成分，具有抗炎作 SCXK（辽）2020-0001。实验方案及规程符合广西医科
用，且本课题组前期开展TFB对胰岛素抵抗作用的细胞 大学动物伦理学审查标准（批准号202204004）。
实验证实 TFB 在体外具有抗氧化能力，并对 c-Jun 氨基 2 方法
端 激 酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和 蛋 白 激 酶 C 2.1 动物分组、给药、造模及取材
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（protein kinase C，PKC）表达具有改善作用 。因JNK和 将小鼠适应性饲养 1 周后，随机分为正常对照组、
PKC 在神经炎症中具有调控的作用，以上提示 TFB 可 LPS组和TFB低、中、高剂量组，每组10只。参照相关文
能具有抑制神经炎症反应的作用。本实验通过脂多糖 献 的给药方法，TFB 低、中、高剂量组小鼠按 60、120、
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（lipopolysaccharide，LPS）建立小鼠神经炎症模型，探究 240 mg/kg 剂量灌胃 TFB 溶液（以生理盐水制备），正常
TFB对小鼠神经炎症的改善作用及可能的作用机制，为 对照组和 LPS 组小鼠灌胃生理盐水，灌胃体积均为 0.2
后期TFB的研究开发提供实验依据。 mL，每日1次，连续给药21 d。从给药第15天起，除正常
1 材料 对照组外，其余组小鼠连续7 d腹腔注射LPS（400 μg/kg）

1.1 主要仪器 建立神经炎症模型 。末次给药 4 h 后，麻醉小鼠，取脑
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本研究所用主要仪器有 BX53 型生物显微镜（日本 组织，每组3只小鼠脑组织用4%多聚甲醛固定，用于苏
Olympus公司）、H1650-W型离心机（湖南湘仪实验室仪 木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色实验；剩余 7 只
器开发有限公司）、Flexstation3 型多功能酶标仪（美国 小鼠脑组织分为左右两半，－20 ℃条件下冻存，7 只小
Molecular Devices公司）、ICV-450型电热恒温培养箱（日 鼠左半脑用于 NO 含量和炎症因子含量检测，3 只小鼠
本Asone公司）、DYCZ-40型电转仪（北京六一仪器厂）。 右半脑用于炎症通路相关蛋白含量检测。

· 1720 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 中国药房 2023年第34卷第14期