Page 55 - 《中国药房》2023年14期

incomplete cell membrane edges and cell structures； the spontaneous alternating response rate， the times of crossing platform， the
number of Nissl bodies， the protein expressions of PINK1， Parkin， LC3B， SYP， GAP-43， and PSD-95 were decreased
significantly， compared with control group； swimming latency （fourth and fifth day）， the protein expressions of AT8 and p62，the
phosphorylation levels of Ser199 and Ser202 were increased or lengthened significantly， compared with control group （P＜0.05 or
P＜0.01）. Compared with model group， the above symptoms and indexes of mice were improved significantly in administration
groups （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS Dianxianqing granules can effectively improve cognitive impairment in P301S
mice，the mechanism of which may be associated with inducing mitochondrial autophagy， reducing the hyperphosphorylation of tau
protein， up-regulating the expression of synaptic-associated proteins in brain tissue，and repairing damaged neural cells.
KEYWORDS Dianxianqing granules； Alzheimer’s disease； mitophagy； tau protein； synapse； neural cells； learning and memory
disorders

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种常 小鼠为对象，以线粒体自噬为靶点，初步探讨癫痫清颗
见的神经退行性疾病，其临床表现为学习和记忆能力下 粒对 AD 小鼠的神经保护作用，旨在为 AD 治疗药物的
降，主要病理特征为过度磷酸化的 tau 蛋白导致细胞内 研发提供实验依据。
[1]
神经纤维缠结形成，从而诱导细胞外老年斑沉积 。然 1 材料
而，AD的具体发病机制尚不明确。近期研究结果表明， 1.1 主要仪器
[1]
线粒体损伤可能出现在AD发病早期 ，而线粒体可通过 本研究所用主要仪器包括DW-200型脑立体定位仪
[2]
自噬等多种方式进行自身平衡状态的动态调节 。研究 （成都泰盟科技有限公司）、Neofuge 13R型酶标仪（美国
指出，线粒体自噬即借助自噬小体途径将错误折叠的蛋 BioTek 公司）、ImageQuant 350 型凝胶成像系统（美国
[3]
白和受损的线粒体吞噬、降解 。若自噬功能受损，大量 GE Healthcare 公司）、DMI3000 B 型光学显微镜（德国
毒性蛋白和受损线粒体将会蓄积，导致 AD 患者或模型 Leica公司）等。
动物体内三磷酸腺苷水平下降、神经细胞损伤、突触丢 1.2 主要药品与试剂
[4]
失，从而诱导 tau 蛋白过度磷酸化 。PTEN 诱导激酶 1 癫痫清颗粒[批号 20180310，规格 8 g/包（以生药量
（PTEN-induced putative kinase-1，PINK1）是存在于线粒 计）]由辽宁中医药大学附属第二医院提供；盐酸多奈哌
体中的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，Parkin是分布于细 齐片（阳性对照药，批号 140606A，规格 5 mg）购自卫材
胞质中的一种具有连接活性的 E3 泛素连接酶，线粒体 （中国）药业有限公司；兔源丝氨酸 202（serine 202，
自噬启动后，PINK1/Parkin通路将被激活，从而抑制AD Ser202）、Ser199、tau-5、β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体
[5]
动物模型 tau 蛋白的过度磷酸化，并逆转其认知缺陷 。 （ 批 号 分 别 为 bs-11240R、bs-5417R、bs-20445R、bs-
可见，探索能够通过调控PINK1/Parkin通路来改善线粒 10966R）均购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠源丝
体自噬功能的药物可能会为AD的治疗提供新的选择。 氨酸 202/苏氨酸 205 位点磷酸化 tau（phospho-tau serine
目前，临床尚无治疗AD的有效药物，西医以靶向神 202 and threonine 205，简称“AT8”）单克隆抗体（货号
经递质类药物为主，治疗效果有限；而中药及其复方对 MN1020B）购自美国Invitrogen公司；鼠源突触生长蛋白
AD症状的缓解效果显著 ，故开发中药复方可为AD患 （synaptophysin，SYP）、生 长 相 关 蛋 白 43（growth-
[6]
者提供更多的候选药物。癫痫清颗粒为辽宁省中医药 associated protein-43，GAP-43）、突 触 后 密 度 蛋 白 95
研究院的中药复方专利药（专利号 ZL201110069494）， （postsynaptic density protein-95，PSD-95）、PINK1单克隆
由熟地黄、制何首乌、芍药（白芍）、石菖蒲、柴胡、郁金、 抗 体（ 货 号 分 别 为 SC17750、SC32290、SC17790、
知母等10味中药组成，具有填精益智、开窍豁痰、活血祛 SC517353）均购自美国Santa Cruz公司；鼠源Parkin单克
瘀的功效，主要用于治疗神情淡漠、寡言少语、反应迟 隆抗体（批号4211S）购自美国Cell Signaling Technology
[7]
钝、善忘等症 。研究发现，活性氧的堆积和氧化应激的 公 司 ；鼠 源 微 管 相 关 蛋 白 1 轻 链 3B（microtubule-
[8]
发生均可导致线粒体损伤 。本课题组前期研究结果显 associated protein 1 light chain 3B，LC3B）、p62 蛋白单克
示，癫痫清颗粒能通过调节核因子F相关因子2、血红素 隆抗体（货号分别为 ab48394、ab56416）均购自英国 Ab‐
[9]
氧合酶 1 等途径来抑制氧化应激的发生 。基于此，本 cam 公 司 ；BCA 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒（ 批 号
课题组推测，癫痫清颗粒能够减轻线粒体损伤，调节线 120219200821）购自上海碧云天生物技术有限公司；辣
粒体稳态，但这种作用能否通过线粒体自噬途径介导尚 根过氧化物酶标记的山羊抗兔、山羊抗鼠IgG二抗（批号
不明确。为此，本研究以 tau 蛋白过度磷酸化的 P301S 分别为 141987、217903）均购自北京中杉金桥生物技术

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1713 ·