Page 63 - 《中国药房》2023年14期

2.2 小鼠神经元形态的观察
将 4% 多聚甲醛固定好的脑组织进行常规的脱水、
透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡，进行HE染色，中性树胶封
片，显微镜下观察小鼠神经元形态的变化。
2.3 小鼠脑组织中NO含量的检测

取冻存的脑组织，称重后剪碎，加入磷酸盐缓冲液 A.正常对照组 B. LPS组
（PBS 溶液，0.01 mol/L，pH7.4，下同）在冰浴下研磨成
10% 组织匀浆，于 4 ℃下 3 000 r/min 离心 10 min，取上
清 液 ，按 照 NO 测 定 试 剂 盒 说 明 书 对 NO 含 量 进 行
检测。
2.4 小鼠脑组织中炎症因子含量的检测
取冻存的脑组织，加入 PBS 溶液在冰浴下研磨成 C. TFB低剂量组 D. TFB中剂量组
10% 组织匀浆，于 4 ℃下 3 000 r/min 离心 10 min，取上
清液，按照 ELISA 试剂盒说明书对 TNF-α、IL-1β、IL-6、
IL-10的含量进行检测。
2.5 小鼠脑组织中炎症通路相关蛋白表达的检测
取冻存脑组织剪碎，加入含苯甲基磺酰氟的 RIPA
E. TFB高剂量组
裂解液研磨于冰上裂解 30 min，取裂解液离心（4 ℃，
→：细胞核固缩的神经元。
12 000 r/min，5 min），用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定 图1 小鼠大脑海马区神经元HE染色图
各组蛋白浓度。蛋白溶液与 5×Loading Buffer 混合沸
3.2 TFB 对神经炎症模型小鼠脑组织中 NO 含量的
水浴 10 min 变性，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，转
影响
移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，用含 5% 脱脂奶粉的
与正常对照组相比，LPS 组小鼠脑组织中 NO 含量
TBST 缓冲液在室温下封闭 2 h。用封闭液分别稀释相
显著增加（P＜0.05）；与 LPS 组相比，TFB 低、中、高剂量
应的 β-actin、iNOS、COX-2、Myd88 和 PKC 一抗（稀释比
组小鼠脑组织中 NO 含量均显著降低（P＜0.05）。结果
例分别为1∶5 000、1∶1 000、1∶500、1∶5 000、1∶5 000），使
见图2。
PVDF 膜浸泡于一抗孵育液中，4 ℃孵育过夜；TBST 缓
4
冲液洗去一抗，室温孵育辣根过氧化物酶标记的二抗
（1∶10 000）2 h；TBST 缓冲液洗去二抗，PVDF 膜浸泡于 a
ECL化学发光液中显色，成像，采用IPP软件分析蛋白条 b
带的灰度值。以 β-actin 作为内参，分析 iNOS、COX-2、 （ μmol/g prot ） 3 b
Myd88、PKC 蛋白的相对表达量（蛋白相对表达量＝目 2 b
的蛋白条带灰度值/内参条带灰度值）。 NO含量/
1
2.6 统计学方法
采用 SPSS 17.0 软件进行数据分析，结果以 x±s 表
0
示。采用单因素方差分析以及LSD-t检验进行多组间及 正常对 LPS组 TFB低 TFB中 TFB高
照组 剂量组 剂量组 剂量组
组间两两比较，检验水准α＝0.05。 a：与正常对照组相比，P＜0.05；b：与LPS组相比，P＜0.05。
3 结果 图2 TFB 对 LPS 诱导的神经炎症模型小鼠脑组织中
NO含量的影响（n＝7）
3.1 TFB对神经炎症模型小鼠神经元形态的影响
正常对照组小鼠脑组织的海马结构较为完整，神经 3.3 TFB对神经炎症模型小鼠脑组织中炎症因子含量
元形态规则，排列较为紧密，核大而圆。LPS 组小鼠脑 的影响
组织的海马区神经元排列稀疏紊乱，大量神经元固缩， 与正常对照组相比，LPS 组小鼠脑组织中 TNF-α、
核缩小。TFB 低、中、高剂量组小鼠上述神经元病理变 IL-1β、IL-6 含量均显著增加，IL-10 含量显著降低（P＜
化较LPS组均明显改善。结果见图1。 0.05）；与 LPS 组相比，TFB 低、中、高剂量组小鼠脑组织

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1721 ·