Page 76 - 《中国药房》2023年13期
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in  high-dose  group  of  Zhongfeng  yure  decoction （P＜0.05  or  P＜0.01）.  CONCLUSIONS  Zhongfeng  yure  decoction  has  a  certain
          intervention  and  therapeutic  effect  on  MCAO  model  rats.  The  mechanism  may  be  to  reduce  the  secretion  of  inflammatory  factors
          TNF-α and IL-6， down-regulate the expression of caspase-3 protein in ischemic brain tissue， up-regulate the expression of p-AKT
          protein， so as to protect the neurons.
          KEYWORDS     Zhongfeng  yure  decoction；  ischemic  stroke；  middle  cerebral  artery  occlusion  model；  caspase-3；  phosphorylated
          protein kinase B； rats


              缺血性脑卒中作为我国发病率最高的疾病之一，尤                          牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、正常兔血
          其高发于老年患者，严重危害人们的健康                  [1―2] 。目前，静     清、磷酸化AKT（phosphorylated AKT，p-AKT）一抗、cas‐
          脉溶栓是临床公认的治疗缺血性脑卒中的主要方法，但溶                           pase-3一抗、辣根过氧化酶（HRP）标记的山羊抗兔二抗、
          栓药物组织型纤溶酶原激活物（tissue-type plasminogen               组化试剂盒 DAB 显色剂（批号分别为 G1202、G0002、
          activator，t-PA）会增加颅内出血的风险，且较窄的治疗窗                   G5001、 G1209、 GB13012-3、 GB110091、 GB23303、
                                  [3]
          限制了患者的最佳治疗时间 。因此，开发低副作用、高                           G1211）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；苏木素-
          安全性的药物对缺血性脑卒中的治疗具有重要意义。                             伊红（HE）染液（批号20200726）购自南京建成生物科技
              中风瘀热方是南京中医药大学附属中西医结合医                           有限公司；注射用青霉素钠（批号190115）购自山东鲁抗
          院的临床经验方，由水牛角15 g、地黄10 g、赤芍10 g、郁                    医药股份有限公司。
          金10 g、牡丹皮6 g、石菖蒲6 g配伍组成，具有清热开窍、                     1.3 实验动物
          凉血化瘀的功效，临床主要用于治疗急性脑梗死。多年                                本研究所用动物为雄性SPF级SD大鼠，共85只，体
          临床观察表明，中风瘀热方可以改善患者的神经功能缺                            质量250 g左右，鼠龄8周，购自上海西普尔-必凯实验动
          损和血液流变学指标，提高患者日常自主生活能力和生                            物有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（沪）2018-
          活质量   [4―6] 。本课题组前期采用超高效液相色谱-四极杆                    0006。大鼠饲养于江苏省中医药研究院动物房内。饲
          飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术对中风瘀热                     养期间环境温度为（24±1） ℃，相对湿度为55%±10%，
          方水提取液进行分析和鉴定 ，明确了其主要化学成分                            大鼠自由进食、饮水。本实验方案经江苏省中医药研究
                                   [7]
          有芍药苷、梓醇、益母草苷等。并且本课题组前期采用                            院实验动物福利伦理审查委员会审查后实施，伦理号为
          网络药理学方法对该方治疗缺血性脑卒中的作用靶点                             AEWC-20200622-118。
          进行预测，发现靶点排名靠前的有蛋白激酶 B（protein                       2 方法
          kinase B，AKT）、胱天蛋白酶 3（caspase-3）、肿瘤坏死因              2.1 分组、造模与给药
          子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白细胞介素 6（in‐          实验分为假手术组（n＝15）、模型对照组（n＝18）、
          terleukin 6，IL-6）等，但缺少实验验证。因此，本研究探                  尼莫地平片组（阳性对照，n＝18）、中风瘀热方高剂量组
          讨中风瘀热方对大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery              （n＝17）、中风瘀热方低剂量组（n＝17）。将所有 SD 大
          occlusion，MCAO）模型大鼠的防治作用及可能机制，以                     鼠适应性喂养3周，待体质量为（350±20） g时，尼莫地平
          期为中风瘀热方的临床应用提供实验依据。                                 片组大鼠灌胃尼莫地平片 10.8 mg/kg ；中风瘀热方高、
                                                                                              [8]
          1 材料                                                低剂量组大鼠分别灌胃中风瘀热方 20.52、5.13 g/kg（分
          1.1 主要仪器                                            别为成人临床等效剂量的4、1倍）；假手术组与模型对照
              AT201 型电子天平购自瑞士 Mettler Toledo 公司；              组大鼠给予等体积生理盐水。每日灌胃给药 1 次，灌胃
          Vert A1型倒置荧光显微镜购自德国Carl Zeiss公司；Sor‐                体积为10 mL/kg，连续 7 d。末次给药后，大鼠隔夜禁食
          vall Legend Micro 21R 型冷冻离心机购自美国 Thermo             不禁水，用 3% 异氟烷在 95%O2/5%CO2引导下于诱导盒
          Fisher Scientific 公司；Tecan M200 Pro 型酶标仪购自瑞         中麻醉大鼠，假手术组只暴露右颈总动脉、颈外动脉和
          士Tecan公司；R415型小动物呼吸麻醉机购自深圳市瑞                        颈内动脉，其余各组均参照改良线栓法制备大鼠MCAO
          沃德生命科技有限公司；E100 型显微镜、DS-U3 型成像                      模型 。采用一端为圆形的尼龙栓线（直径为0.26 mm），
                                                                  [9]
          系统购自日本Nikon公司。                                      从颈外动脉进入颈内动脉内腔17～20 mm，直至感觉有
          1.2 主要药品与试剂                                         阻力立即停止，此时将右颈总动脉处的活结结扎，将尼
              中风瘀热方溶液（批号 202008，规格为每 1 mL 含                   龙栓线固定于血管内，剪去多余的线头和尼龙栓线，无
          2.04 g 生药）由南京中医药大学附属中西医结合医院实                        菌棉球清洁创口内的出血。缝合大鼠颈部皮肤，碘伏消
          验室自制；尼莫地平片（批号BJ47363，规格30 mg/片）购                    毒后将大鼠置于保温毯上直至意识恢复。待大鼠手术
          自德国Bayer公司；TNF-α、IL-6试剂盒（批号分别为CK-                   自然苏醒后进行第 1 次神经功能评分：0 分，无神经症
          E30635、CK-E30646）均购自苏州卡尔文生物科技有限                     状；1分，损伤对侧前肢不能伸直；2分，爬行时向对侧旋
          公司；柠檬酸（pH6.0）抗原修复液、磷酸盐缓冲液（PBS）、                     转；3分，行走时向手术对侧倾倒或转圈；4分，无自发活


          · 1602 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 13                            中国药房  2023年第34卷第13期
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