Page 50 - 《中国药房》2023年13期

织切片，经二甲苯脱蜡、梯度水化后进行 HE 染色，中性 3.2 WZDK治疗肠炎的作用靶点预测结果
树胶封片，晾干。显微镜下观察小鼠结肠组织形态和病 3.2.1 WZDK、肠炎靶点预测结果
理损伤情况，以炎症细胞浸润、黏膜组织损伤（变性、萎 结合LC-MS/MS分析结果及从TCMSP数据库中筛
缩、坏死等）、结肠隐窝破坏等病理组织学改变为主要观
选出的符合 OB≥30%、DL≥0.18 标准的化学成分共有
察指标。
32种。此外，文献研究显示，木香烃内酯及去氢木香内酯
2.4.5 小鼠结肠组织中核心靶点mRNA表达的检测
2 种化学成分对肠炎有一定改善作用 [12―13] ，故纳入。最
采用qPCR法进行检测。每组随机取3只小鼠冻存
终得到34种化学成分。通过TCMSP、PhamMapper数据
的结肠组织50 mg，加入Trizol试剂1 mL，按说明书操作
库获取并去重后得到549个药物靶点。通过GeneCards、
提取总RNA，测定总RNA的浓度和纯度后，根据试剂盒
说明书反转录得cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增。 OMIM数据库，将所获靶点进行合并去重，共得到1 219
反应体系包括：上、下游引物各 0.4 µL，2×Green qPCR 个与肠炎密切相关的靶点。
SuperMix 10 µL，cDNA 模板 2 µL，无 RNA 酶水 7.2 µL。 3.2.2 PPI网络构建及核心靶点的筛选结果
PCR反应条件为：94 ℃预变性30 s；94 ℃变性5 s，60 ℃ 将 549 个药物靶点和 1 219 个与肠炎密切相关的靶

退火30 s，共40个循环。以GAPDH为内参，采用2 －ΔΔCt 法 点取交集，共得到交集靶点（即治疗肠炎的潜在靶点）
计算各指标mRNA的表达水平，结果以正常对照组为标 120 个。将潜在靶点导入 Cytoscape 3.7.2 软件，绘制“化
准进行归一化处理。引物序列及扩增产物长度见表1。 学成分-靶点-疾病”拓扑图，见图1。以节点度值中位数
表1 引物序列及扩增产物长度 的2倍为阈值，同时以度值、紧密度、介数中心度为阈值
基因 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp 筛选网络的核心靶点，排名前 10 位的核心靶点包括 IL-
GAPDH 上游引物：CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG 138
下游引物：GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT 1β、TNF、AKT1、TP53、IL-6等。结果见图2。
TNF-α 上游引物：CCAAAGGGATGAGAAGTTCC 133
下游引物：CTCCACTTGGTGGTTTGCTA
IL-6 上游引物：TGATGCACTTGCAGAAAACAA 270
下游引物：GGTCTTGGTCCTTAGCCACTC
IL-1β 上游引物：CAGCAGCATCTCGACAAGAG 217
下游引物：AAAGAAGGTGCTTGGGTCCT
AKT1 上游引物：GTGGCAAGATGTGTATGAGAAGA 243
下游引物：ACTGGCTGAGTAGGAGAACTG
TP53 上游引物：GCGTTGCTCTGATGGTGAC 235
下游引物：GCGTGATGATGGTAAGGATGG

2.5 统计学方法
采用SPSS 13.0软件对实验数据进行统计分析。计
量资料满足正态分布，以x±s表示。多组间比较采用单
因素方差分析，进一步的两两比较采用 LSD-t 检验。检
验水准α＝0.05。 注：●节点代表WZDK治疗肠炎的潜在靶点；●节点代表WZDK
3 结果 中的化学成分；●节点代表肠炎，节点大小代表度值的大小。
图1 “化学成分-靶点-疾病”网络图
3.1 WZDK化学成分分析结果
在负离子模式下共检测到 134 种化学成分，其中黄
-
酮类成分25种，生物碱类成分4种，萜类成分17种，苯丙
素类成分21种，氨基酸、有机酸衍生物共11种，脂肪酸、
- β
脂肪酰类成分共 14 种，酚类成分 14 种，芳香族化合物、
糖类、羟酸及其衍生物共 7 种，其他类成分 21 种。在正
离子模式下共检测到 182 种化学成分，其中黄酮类成分
19 种，生物碱类成分 49 种，萜类成分 59 种，苯丙素类成
分21种，酚类成分13种，脂肪酸、脂肪酰类成分4种，氨
基酸、有机酸衍生物共5种，酯类、醌类、芳香族化合物共
7种，其他类成分5种。 图2 核心靶点网络

· 1580 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 13 中国药房 2023年第34卷第13期