Page 37 - 《中国药房》2023年12期
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据前期预实验结果确定浓度），每组设 3 个复孔。按 度TA和SPV组图略）。
ELISA试剂盒说明书操作，用酶标仪测定450 nm波长处 3.2 TA和SPV对细胞毒性的影响
的光密度，计算细胞上清液中 caspase-3、caspase-9 的 如图 2 所示，在给药后 4～6 h（监测时间 28～30 h）
含量。 TA和SPV开始对4种肿瘤细胞的活性产生影响（给药干
2.6 细胞中凋亡、ERS、自噬相关蛋白表达检测 预后部分细胞活性升高可能是由于应激反应），与空白
取对数生长期的 HCT-8 细胞，按“2.3”项下方法分 组比较，细胞增殖速率均减慢。给予 TA 和 SPV 后约 4
组，加药，继续培养 48 h，另设空白组，每组设 3 个复孔。 h，随着药物浓度的增加，HCT-8 细胞的活性也随之降
培养结束后提取细胞总蛋白，用 BCA 法检测蛋白样本 低；而 TA 和 SPV 干预对其余 3 种细胞的增殖抑制作用
浓度，经电泳、切胶、转膜、封闭后，加入抗体孵育[一抗： 较弱。
β-actin、p-Akt（Thr308）、p-Akt（Ser473）、Bax、Bcl-2、Bip、 3.3 TA 和 SPV 对 HCT-8 细胞上清液中 caspase-3、cas‐
LC3Ⅱ、CHOP、生存素，稀释比均为1∶1 000；二抗：相应 pase-9含量的影响
的 IgG，稀释比均为 1∶10 000]，曝光，显影，以 β-actin 为 与空白组比较，中、高浓度TA和高浓度SPV以及紫
内参，用 Image Lab 软件分析目标蛋白与内参的灰度值 杉醇干预后的 HCT-8 细胞上清液中 caspase-3 含量均显
比值。 著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），且高浓度 TA 的效果与紫
2.7 统计学分析 杉醇相近；高浓度TA和中、高浓度SPV干预后的HCT-8
采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。数据以x±s 细胞上清液中 caspase-9 含量均显著增加（P＜0.05 或
表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐性时组 P＜0.01）。结果见图3。
间两两比较采用 LSD-t 检验，方差不齐时组间两两比较 3.4 TA 和 SPV 对 HCT-8 细胞中凋亡、ERS、自噬相关
采用Tamhane’s T2检验。检验水准α＝0.05。 蛋白表达的影响
3 结果 3.4.1 凋亡相关蛋白 与空白组比较，TA 和 SPV 干预
3.1 TA和SPV对4种肿瘤细胞形态的影响 后的HCT-8细胞中p-Akt（Thr308）（低浓度TA组除外）、
与空白组比较，低、中、高浓度 TA 和 SPV 干预后的 p-Akt（Ser473）、Bcl-2（低浓度 TA 组除外）、生存素蛋白
HCT-8、HepG2、Bel-7402、A549细胞形态逐渐不规则，出 表达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），Bax 蛋白表
现体积缩小、细胞核皱缩的现象，显微图见图1（低、中浓 达水平均显著升高（P＜0.01）。结果见图4和图5。
空白组
高浓度TA组
高浓度SPV组
HCT-8 HepG2 Bel-7402 A549
图1 TA和SPV对4种肿瘤细胞形态的影响（×200）
中国药房 2023年第34卷第12期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 12 · 1439 ·
