Page 33 - 《中国药房》2023年12期
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过氧化物的清除能力下降进而导致氧自由基过度积累，
          cleaved caspase-3                           19 kDa
                                                             脂质过氧化产物 MDA 大量增加，进一步加重了细胞的
                                                             损伤。本研究还显示，缺氧组细胞上清液中LDH含量升

                Bcl-2                                 26 kDa  高，可能是由于缺氧引起脂质过氧化损伤增加和抗氧化
                                                             能力下降，导致细胞膜的完整性受到破坏，进而导致细
                                                             胞膜通透性增加，使细胞中的 LDH 外漏到培养基中所
                 Bax                                  21 kDa
                                                             致；而黄芩素组细胞上清液中LDH含量较缺氧组下降，
                                                             表明黄芩素可通过调控氧化/抗氧化平衡保护细胞膜的
               β-actin                                43 kDa
                                                             完整性，减轻缺氧造成的细胞膜损伤，但具体机制有待
                        对照组                      缺氧组                       黄芩素组  进一步研究。
                       A.各组凋亡相关蛋白表达电泳图
                                                                 通过Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测皮质
               2.0
               1.8                       c   cleaved caspase-3  神经元细胞的凋亡情况，结果表明，缺氧条件下，RN-C
               1.6           a               Bcl-2/Bax比值
               1.4                                           细胞凋亡率增加，黄芩素组凋亡率下降，说明黄芩素可
               1.2
               蛋白表达  1.0        b                            减少缺氧诱导的RN-C细胞凋亡损伤。细胞周期检测结
               0.8
                                     c                       果表明，缺氧处理后，G1 期的细胞比例明显升高，相对
               0.6                                           应的 G2+S 期细胞比例明显降低，细胞周期阻滞在 G1
               0.4
               0.2                                           期，说明缺氧导致细胞增殖周期进程受阻，细胞增殖能
                0
                    对照组                  缺氧组              黄芩素组  力降低；经黄芩素干预后G1期的细胞比例明显降低，相
              B.各组cleaved caspase-3蛋白表达、Bcl-2/Bax比值柱形图（n＝3）  对应的 G2+S 期细胞比例明显升高，说明黄芩素逆转了
             a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05；c：与缺氧组
                                                             细胞周期阻滞的现象，促进了细胞增殖。细胞周期包括
         比较，P＜0.01
         图5 黄芩素对缺氧 RN-C 细胞中 cleaved caspase-3 蛋              G1期、S期、G2期和M期，G1期是细胞进入细胞分裂过
               白表达、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响                          程的限制点，在缺氧刺激下，细胞将停止细胞分裂过程，
                                                             同时进行分裂前损伤修复，如果损伤无法修复，则细胞
          低，但经黄芩素干预后，RN-C 细胞存活率明显升高，提
                                                             会发生凋亡或是进入失活状态 G0 期等待进一步的信
          示黄芩素可提高细胞存活率，其中，0.1 μmol/L的黄芩素
                                                             号 。另一方面，细胞增殖能力减弱亦可以反向促进细
                                                               [15]
          对细胞存活率提升效果最佳，故本研究应用该浓度进行
                                                                       [16]
          后续研究。                                              胞凋亡进程 。本研究表明，黄芩素可减少缺氧引起的
              神经细胞的迁移与中枢神经系统的发育、神经细胞                         细胞凋亡，可能与减少缺氧RN-C细胞G1期细胞周期阻
          的分化密切相关，对于神经系统的形成、修复及其功能                           滞有关。
                                      [13]
          的正常发挥有着非常关键的作用 。本研究发现，缺氧                               细胞凋亡是一种高度受控的细胞程序性死亡形式，
          条件下 RN-C 细胞的迁移能力明显减弱，经黄芩素处理                        可触发细胞自我毁灭而不受任何外部影响，是许多生理
          后缺氧 RN-C 细胞的迁移能力显著提高，说明黄芩素对                        稳态和病理变化所必需的流程，以核固缩、细胞皱缩、细
          缺氧RN-C细胞的迁移能力具有改善作用。                               胞膜起泡和DNA片段化为特征。Bcl-2家族蛋白是调控
              SOD和MDA是细胞损伤的抗氧化酶系统中的关键                        凋亡因子释放的主要分子，可分为促凋亡蛋白和抗凋亡
          酶，它们的活性和含量变化能反映细胞的脂质过氧化水                           蛋白两类。Bcl-2 是主要的抗凋亡蛋白成员，其主要存
          平和自由基水平。其中，SOD可降低机体的氧化应激水                          在于线粒体膜上。Bax 是主要的促凋亡蛋白成员，一般
          平，是机体内重要的内源性自由基清除剂；而MDA含量                          存在于胞质中，当接收到凋亡信号时，Bax重新定位于线
          高低则代表了机体的脂质过氧化损伤程度。缺氧会引                            粒体表面，释放凋亡因子。细胞凋亡过程由促凋亡分子
          起细胞代谢障碍，进而产生过量的氧自由基，又进一步                           和抗凋亡分子协同作用，二者比例的变化可通过线粒体
                                          [14]
          导致氧自由基清除剂SOD的活性下降 。同时，缺氧会                          途径共同决定细胞是否进入凋亡程序。caspase-3 是半
          导致细胞产生过量的活性氧和氧化/抗氧化失衡。生物                           胱氨酸蛋白酶的一族，是细胞凋亡的中心调节分子，与
          膜中含有丰富的不饱和脂肪酸，活性氧的过量蓄积极易                           促凋亡信号紧密结合。正常情况下，caspase-3以酶原的
          引起细胞膜以及细胞器膜脂质过氧化，进而产生过量的                           形式存在于胞质中，在接收到缺氧信号后，线粒体膜损
          脂质过氧化产物MDA 。本研究中，缺氧24 h后，RN-C                      伤，其被释放至胞质中，在凋亡通路被激活，caspase-3可
                             [14]
                                                                                                       [17]
          细胞的SOD活性下降、MDA含量升高，说明细胞对脂质                         剪切为效应cleaved caspase-3，从而执行凋亡程序 。本

          中国药房  2023年第34卷第12期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 12    · 1435 ·
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