Page 37 - 中国药房2023年10期
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among  which  TYSA  has  the  most  obvious  effect.  Its  mechanism  of  action  may  be  related  to  upregulating  the  Keap1/Nrf2/HO-1
          signaling pathway and inhibiting oxidative stress
          KEYWORDS    Tylophora  yunnanensis；  non-alcoholic  steatohepatitis；  free  fatty  acids；  normal  liver  cells  LO2；  liver  function；
          antioxidant activity； rat



              非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver di-        MDA）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）测定试剂盒（批号
          sease，NAFLD）是一种代谢综合征，全球患病率约为                       分 别 为 20191102、20191203、201911202、20191129、
          25%，我国患病率为17%～33%，已成为全球最常见的慢                       20191129、20191130、20220822、20220718、20220721）均
          性肝病之一，并将很快取代丙型肝炎成为肝移植的主要                           购于南京建成生物工程研究所；SOD、MDA、GSH 测定
          原因 。NAFLD 包括非酒精性脂肪肝（non-alcoholic                  试 剂 盒（ 批 号 分 别 为 20111011R、20111016R、
              [1]
          fatty liver，NAFL）和非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic          20111008R）均购于江苏酶免实业有限公司；逆转录试剂
          steatohepatitis，NASH）。NASH可发展为肝纤维化、肝硬              盒、荧光定量聚合酶链式反应（PCR）试剂盒（批号分别
          化和肝细胞癌，严重威胁患者的生命健康                 [2―3] 。因此，探     为 1174412081、1334412151）均购于江苏愚公生命科技
          寻有效预防NASH的药物具有重要意义。                                有 限 公 司 ；4% 多 聚 甲 醛 通 用 性 组 织 固 定 液（批 号
              小白薇是云南楚雄地区彝族广泛使用的一种野生                          HJ203501）购于武汉市盖云天生物技术有限公司；甘油
          药材，是萝藦科娃儿藤属植物云南娃儿藤Tylophora yun‐                   醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）内参引物（批号I801KA5685）
          nanensis Schltr.的根，广泛分布于西南及广西等地。其味                 购于生工生物工程（上海）股份有限公司；乙醇、乙酸乙
          苦、涩、性寒，归肝、脾经，具有舒筋活络、活血止痛等功                         酯、正丁醇均为分析纯，水为超纯水。
                                                     [4]
          效，民间常用于治疗风湿骨痛、肝炎、肾炎、痢疾等 ，但                         1.3 实验动物与饲料
          其作用机制尚不明确。本研究为明确小白薇活性部位，                               6～8周SPF级雄性SD大鼠36只，体质量190～210
          以及为活性成分的追踪提供指导，考察了小白薇不同萃                           g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物生产许
          取物对 LO2 细胞脂肪变性后细胞内脂滴、脂质水平、氧                        可证号为 SCXK（湘）2016-0002。基础饲料购于江苏美
          化应激水平的影响，以及对高脂饮食诱导的NASH模型                          迪森生物医药有限公司。将82.5%基础饲料、10%猪油、
          大鼠血清脂质水平和肝组织中氧化应激水平的影响。                            5%蛋黄粉、2%胆固醇、0.5%胆酸钠混匀，制备成形后于
          1 材料                                               50 ℃烘干，即得高脂饲料。本实验方案经云南中医药大
          1.1 主要仪器                                           学实验动物伦理委员会批准（批准号为R062019046）。
              本研究所用主要仪器包括Infinite M200 Pro型酶标                1.4 细胞
          仪（瑞士 Tecan 公司）、JB-P5 包埋机（武汉俊杰电子有限                      人正常肝细胞LO2购于中国科学院昆明细胞库。
          公司）、MCO-20AIC 型 CO2培养箱（日本 Sanyo 公司）、               2 方法
          RM2016 型病理切片机（上海徕卡仪器有限公司）、                         2.1 小白薇萃取物的制备
          ECLIPSE 型倒置显微镜和 NIKON DS-U3 型成像系统                      将小白薇药材粉碎，取粉末2 kg，加入8倍量的95%
         （日本Nikon公司）。                                        乙醇，浸泡后回流提取3次，合并3次滤液，浓缩，得小白
          1.2 主要药品与试剂                                        薇醇提物（TYS，得率 24.74%）。取部分 TYS，加水溶解
              小白薇药材购于云南昆明，采购时间为 2017 年 7                     成混悬溶液，先用小极性乙酸乙酯萃取3次后，再用大极
          月，药材经云南中医药大学药用植物教研室普春霞副教                           性正丁醇萃取3次，分别合并相同的萃取液，经浓缩后冷
          授鉴定为萝藦科娃儿藤属植物云南娃儿藤 T. yunnanen‐                    冻 干 燥 ，得 小 白 薇 乙 酸 乙 酯 萃 取 物（TYSA，得 率
          sis Schltr. 的根。水飞蓟宾胶囊（阳性对照药物，批号                    16.23%）和小白薇正丁醇萃取物（TYSB，得率22.57%）。
          150202012，规格每粒含水飞蓟宾 35 mg）购于天津天士                   2.2 体外实验
          力圣特制药有限公司；油红O染液、苏木精-伊红（HE）染                        2.2.1 分组与给药 取 LO2 细胞，用含 10% 胎牛血清、
          液（批号分别为 20220318、ZH202812）均购于北京索莱                  1%青霉素-链霉素的DMEM完全培养液，在培养箱中培
          宝 科 技 有 限 公 司 ；油 酸 钠 、棕 榈 酸 钠（批 号 分 别 为            育至80%增长时进行实验，并在前期实验基础上设计分
                                                                                    5
          C04D10A104983、C04D10A104981）均购于上海源叶生               组与给药剂量。将 1×10 个/mL 细胞接种于 6 孔板
          物科技有限公司；总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰              中，分为正常组、模型组、水飞蓟宾组（100 μmol/mL）、
          甘油（triacylglycerol，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-             TYS 组（50  μg/mL）、TYSA 组（50  μg/mL）、TYSB 组
          density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆    （50 μg/mL），每组 3 个复孔。待细胞贴壁后，除正常组
          固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、丙氨   外，其余各组均用1 mmol/L游离脂肪酸（油酸钠-棕榈酸
          酸转氨酶（alanine transaminase，ALT）、天冬氨酸转氨酶             钠质量比为2∶1）诱导24 h使细胞脂肪变性，再加入相应
         （aspartate transaminase，AST）、超氧化物歧化酶（super‐         药物干预24 h。
          oxide  dismutase，SOD）、丙 二 醛（malondialdehyde，       2.2.2 细胞内脂质、肝功能和抗氧化相关指标的测定 按


          中国药房  2023年第34卷第10期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 10    · 1183 ·
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