Page 25 - 《中国药房》2023年9期
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significant destruction of cartilage tissue. The content of IL-6 in serum, the content of TNF-α, the protein expression levels of
RANKL, RANK, TRAF6 and NFATC1 in the ankle joint tissues were increased significantly (P<0.05), while the contents of IL-
4 and IL-10, the protein expression level of OPG in the ankle joint tissues were decreased significantly (P<0.05). Compared with
model group, above pathomorphological changes and the content/level of indicators of mice in each administration group were
significantly improved (P<0.05). CONCLUSIONS Total saponins of C. speciosa may exert osteoprotective effects on RA model
mice, the mechanism of which may be associated with reducing the contents of IL-6 and TNF-α, increasing the contents of IL-4 and
IL-10, inhibiting the activation of RANKL/RANK/OPG signal pathway, thus inhibiting the proliferation of osteoclasts and
promoting the repair of cartilage and bone tissue.
KEYWORDS total saponins of Chaenomeles speciosa; rheumatoid arthritis; receptor activator of nuclear factor- κB ligand;
receptor activator of nuclear factor-κB; osteoprotegerin
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以滑 PRO型酶标仪(瑞士Tecan公司)。
[1]
膜炎症和关节骨破坏为主的慢性全身性、炎症性疾病 。 1.2 主要药品与试剂
其主要病理特征是滑膜增生、血管生成、血管翳形成、炎 资木瓜总苷(批号202205)为本课题组自制,经高效
症细胞浸润、关节软骨破坏、骨破坏,最终导致关节功能 液相色谱法检测其中主要成分为齐墩果酸、熊果酸,其含量
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障碍甚至畸形 。其中骨破坏是 RA 致畸致残的主要原 分别为0.90%、0.17%;雷公藤多苷片(批号14002003117,
[3]
因 。目前很多 RA 的临床治疗药物由于具有较强的毒 规格 10 mg)购自远大医药黄石飞云制药有限公司;多
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副作用和昂贵的成本,限制了其临床应用 。因此,开发 肽 片段 hGPI 325-339(IWYINCFGCETHAML)和 hGPI
低毒高效的抗RA关节骨破坏药物具有重要的经济和社 469-483(EGNRPTNSIVFTKLT) 均由宁波康贝生化有
会意义。 限公司合成;百日咳毒素(批号 180,规格 50 μg)购自美
资木瓜总苷是从中药皱皮木瓜 Chaenomeles spe‐ 国 List Biological Laboratories 公司;完全弗氏佐剂购自
ciosa (Sweet) Nakai中提取的有效活性物质。本课题组 美国Sigma公司;小鼠白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、
肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4、
前期研究发现,资木瓜总苷可通过调节肠道菌群来抑
IL-10 酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent
制 K/B×N小鼠(血清转移性关节炎模型小鼠)的炎症因
assay,ELISA)试剂盒(批号分别为 E-EL-M0044c、E-EL-
子水平,从而改善其关节炎症状 ;同时体外研究也发
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M3063、E-EL-M0043c、E-EL-M0046c)均购自武汉伊莱
现,资木瓜总苷中的莽草酸单体成分可通过抑制肥大细
瑞特生物科技股份有限公司;抗酒石酸酸性磷酸酶
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胞脱颗粒,从而对软骨损伤起到保护作用 。然而,资木
(TRAP)染色液、番红固绿染液、兔源 β-肌动蛋白(β-ac‐
瓜总苷在RA骨破坏中的作用仍不明确。
tin)抗体(批号 GB11001)和辣根过氧化物酶(HRP)标
据报道,核因子κB受体活化因子配体(receptor activa-
记的山羊抗兔 IgG 二抗(批号 GB23303)均购自武汉赛
tor of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子 κB 受体
维 尔 生 物 科 技 有 限 公 司 ;兔 源 RANKL 抗 体(批 号
活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)/
WL00285)购 自 沈 阳 万 类 生 物 科 技 有 限 公 司 ;兔 源
骨保护素(osteoprotegerin,OPG)信号通路参与了 RA 的
RANK 抗 体(批 号 ab200369)、兔 源 OPG 抗 体(批 号
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骨破坏进程 。研究发现,在 RA 患者的血清及关节液
ab183910)均购自英国 Abcam 公司;兔源活化 T 细胞核
中,RANKL 的表达水平显著升高,且其表达水平与 RA
因 子 1(nuclear factor of activated T cells 1 protein,
[8]
的风湿活动度评分呈正相关 。因此,本研究拟使用葡
NFATC1)抗体(批号8032)、兔源肿瘤坏死因子受体相关
萄 糖 -6- 磷 酸 异 构 酶(glucose-6-phosphate isomerase,
蛋白 6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,
[9]
G6PI)混 合 多 肽 制 备 DBA/1 小 鼠 RA 模 型 ,并 通 过
TRAF6)抗体(批号67591)均购自美国CST公司。
RANKL/RANK/OPG 信号通路探讨资木瓜总苷对 G6PI
1.3 动物
诱导的 RA 模型小鼠的骨保护作用及可能的作用机制, 本研究所用动物为 SPF 级雄性 DBA/1 小鼠,共 70
为将资木瓜总苷进一步开发为抗RA药物提供实验依据。 只,鼠龄为9~10周,体质量为(22±1) g,均购自北京华
1 材料 阜康生物科技股份有限公司,动物生产许可证号为
1.1 主要仪器 SCXK(京)2019-0008。所有 DBA/1 小鼠均饲养于三峡
本研究所用的主要仪器有Centrifuge 5804R型高速 大学动物实验中心的 SPF 级环境中[实验动物使用许可
离心机[艾本德(上海)国际贸易有限公司]、MPS 60型光 证号为 SYXK(鄂)2022-0061]。饲养环境温度为(22±
学显微镜(德国Leica公司)、ChemiScope 6100型化学发 2) ℃,湿度为(55±2)%,12 h 交替照明。适应性喂养 1
光成像系统(上海勤翔科学仪器有限公司)、DYCZ-40型 周后开始正式实验。实验期间动物自由摄食、饮水,垫
电泳仪(北京六一生物科技有限公司)、NFINITE 200 料保持干燥清洁。本研究通过了三峡大学动物伦理委
中国药房 2023年第34卷第9期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 9 · 1043 ·