Page 25 - 《中国药房》2023年9期
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significant  destruction  of  cartilage  tissue.  The  content  of  IL-6  in  serum，  the  content  of  TNF-α，  the  protein  expression  levels  of
          RANKL， RANK， TRAF6 and NFATC1 in the ankle joint tissues were increased significantly （P＜0.05）， while the contents of IL-
          4 and IL-10， the protein expression level of OPG in the ankle joint tissues were decreased significantly （P＜0.05）. Compared with
          model  group，  above  pathomorphological  changes  and  the  content/level  of  indicators  of  mice  in  each  administration  group  were
          significantly  improved （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Total  saponins  of  C.  speciosa  may  exert  osteoprotective  effects  on  RA  model
          mice， the mechanism of which may be associated with reducing the contents of IL-6 and TNF-α， increasing the contents of IL-4 and
          IL-10，  inhibiting  the  activation  of  RANKL/RANK/OPG  signal  pathway，  thus  inhibiting  the  proliferation  of  osteoclasts  and
          promoting the repair of cartilage and bone tissue.
          KEYWORDS    total  saponins  of  Chaenomeles  speciosa；  rheumatoid  arthritis；  receptor  activator  of  nuclear  factor- κB  ligand；
          receptor activator of nuclear factor-κB； osteoprotegerin


              类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以滑           PRO型酶标仪（瑞士Tecan公司）。
                                                       [1]
          膜炎症和关节骨破坏为主的慢性全身性、炎症性疾病 。                          1.2 主要药品与试剂
          其主要病理特征是滑膜增生、血管生成、血管翳形成、炎                              资木瓜总苷（批号202205）为本课题组自制，经高效
          症细胞浸润、关节软骨破坏、骨破坏，最终导致关节功能                          液相色谱法检测其中主要成分为齐墩果酸、熊果酸，其含量
                      [2]
          障碍甚至畸形 。其中骨破坏是 RA 致畸致残的主要原                         分别为0.90%、0.17%；雷公藤多苷片（批号14002003117，
            [3]
          因 。目前很多 RA 的临床治疗药物由于具有较强的毒                         规格 10 mg）购自远大医药黄石飞云制药有限公司；多
                                             [4]
          副作用和昂贵的成本，限制了其临床应用 。因此，开发                          肽 片段 hGPI 325-339（IWYINCFGCETHAML）和 hGPI
          低毒高效的抗RA关节骨破坏药物具有重要的经济和社                           469-483（EGNRPTNSIVFTKLT） 均由宁波康贝生化有
          会意义。                                               限公司合成；百日咳毒素（批号 180，规格 50 μg）购自美
              资木瓜总苷是从中药皱皮木瓜 Chaenomeles spe‐                 国 List Biological Laboratories 公司；完全弗氏佐剂购自
          ciosa （Sweet） Nakai中提取的有效活性物质。本课题组                 美国Sigma公司；小鼠白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）、
                                                             肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-4、
          前期研究发现，资木瓜总苷可通过调节肠道菌群来抑
                                                             IL-10 酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent
          制 K/B×N小鼠（血清转移性关节炎模型小鼠）的炎症因
                                                             assay，ELISA）试剂盒（批号分别为 E-EL-M0044c、E-EL-
          子水平，从而改善其关节炎症状 ；同时体外研究也发
                                      [5]
                                                             M3063、E-EL-M0043c、E-EL-M0046c）均购自武汉伊莱
          现，资木瓜总苷中的莽草酸单体成分可通过抑制肥大细
                                                             瑞特生物科技股份有限公司；抗酒石酸酸性磷酸酶
                                             [6]
          胞脱颗粒，从而对软骨损伤起到保护作用 。然而，资木
                                                            （TRAP）染色液、番红固绿染液、兔源 β-肌动蛋白（β-ac‐
          瓜总苷在RA骨破坏中的作用仍不明确。
                                                             tin）抗体（批号 GB11001）和辣根过氧化物酶（HRP）标
              据报道，核因子κB受体活化因子配体（receptor activa-
                                                             记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 GB23303）均购自武汉赛
          tor of nuclear factor-κB ligand，RANKL）/核因子 κB 受体
                                                             维 尔 生 物 科 技 有 限 公 司 ；兔 源 RANKL 抗 体（批 号
          活化因子（receptor activator of nuclear factor-κB，RANK）/
                                                             WL00285）购 自 沈 阳 万 类 生 物 科 技 有 限 公 司 ；兔 源
          骨保护素（osteoprotegerin，OPG）信号通路参与了 RA 的
                                                             RANK 抗 体（批 号 ab200369）、兔 源 OPG 抗 体（批 号
                    [7]
          骨破坏进程 。研究发现，在 RA 患者的血清及关节液
                                                             ab183910）均购自英国 Abcam 公司；兔源活化 T 细胞核
          中，RANKL 的表达水平显著升高，且其表达水平与 RA
                                                             因 子 1（nuclear  factor  of  activated  T  cells  1  protein，
                                  [8]
          的风湿活动度评分呈正相关 。因此，本研究拟使用葡
                                                             NFATC1）抗体（批号8032）、兔源肿瘤坏死因子受体相关
          萄 糖 -6- 磷 酸 异 构 酶（glucose-6-phosphate  isomerase，
                                                             蛋白 6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，
                                                [9]
          G6PI）混 合 多 肽 制 备 DBA/1 小 鼠 RA 模 型 ，并 通 过
                                                             TRAF6）抗体（批号67591）均购自美国CST公司。
          RANKL/RANK/OPG 信号通路探讨资木瓜总苷对 G6PI
                                                             1.3 动物
          诱导的 RA 模型小鼠的骨保护作用及可能的作用机制，                             本研究所用动物为 SPF 级雄性 DBA/1 小鼠，共 70
          为将资木瓜总苷进一步开发为抗RA药物提供实验依据。                          只，鼠龄为9～10周，体质量为（22±1） g，均购自北京华
          1 材料                                               阜康生物科技股份有限公司，动物生产许可证号为
          1.1 主要仪器                                           SCXK（京）2019-0008。所有 DBA/1 小鼠均饲养于三峡
              本研究所用的主要仪器有Centrifuge 5804R型高速                 大学动物实验中心的 SPF 级环境中[实验动物使用许可
          离心机[艾本德（上海）国际贸易有限公司]、MPS 60型光                      证号为 SYXK（鄂）2022-0061]。饲养环境温度为（22±
          学显微镜（德国Leica公司）、ChemiScope 6100型化学发                2） ℃，湿度为（55±2）%，12 h 交替照明。适应性喂养 1
          光成像系统（上海勤翔科学仪器有限公司）、DYCZ-40型                       周后开始正式实验。实验期间动物自由摄食、饮水，垫
          电泳仪（北京六一生物科技有限公司）、NFINITE 200                      料保持干燥清洁。本研究通过了三峡大学动物伦理委


          中国药房  2023年第34卷第9期                                                China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9    · 1043 ·
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