Page 25 - 《中国药房》2023年9期
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significant  destruction  of  cartilage  tissue.  The  content  of  IL-6  in  serum,  the  content  of  TNF-α,  the  protein  expression  levels  of
          RANKL, RANK, TRAF6 and NFATC1 in the ankle joint tissues were increased significantly (P<0.05), while the contents of IL-
          4 and IL-10, the protein expression level of OPG in the ankle joint tissues were decreased significantly (P<0.05). Compared with
          model  group,  above  pathomorphological  changes  and  the  content/level  of  indicators  of  mice  in  each  administration  group  were
          significantly  improved (P<0.05).  CONCLUSIONS  Total  saponins  of  C.  speciosa  may  exert  osteoprotective  effects  on  RA  model
          mice, the mechanism of which may be associated with reducing the contents of IL-6 and TNF-α, increasing the contents of IL-4 and
          IL-10,  inhibiting  the  activation  of  RANKL/RANK/OPG  signal  pathway,  thus  inhibiting  the  proliferation  of  osteoclasts  and
          promoting the repair of cartilage and bone tissue.
          KEYWORDS    total  saponins  of  Chaenomeles  speciosa;  rheumatoid  arthritis;  receptor  activator  of  nuclear  factor- κB  ligand;
          receptor activator of nuclear factor-κB; osteoprotegerin


              类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以滑           PRO型酶标仪(瑞士Tecan公司)。
                                                       [1]
          膜炎症和关节骨破坏为主的慢性全身性、炎症性疾病 。                          1.2 主要药品与试剂
          其主要病理特征是滑膜增生、血管生成、血管翳形成、炎                              资木瓜总苷(批号202205)为本课题组自制,经高效
          症细胞浸润、关节软骨破坏、骨破坏,最终导致关节功能                          液相色谱法检测其中主要成分为齐墩果酸、熊果酸,其含量
                      [2]
          障碍甚至畸形 。其中骨破坏是 RA 致畸致残的主要原                         分别为0.90%、0.17%;雷公藤多苷片(批号14002003117,
            [3]
          因 。目前很多 RA 的临床治疗药物由于具有较强的毒                         规格 10 mg)购自远大医药黄石飞云制药有限公司;多
                                             [4]
          副作用和昂贵的成本,限制了其临床应用 。因此,开发                          肽 片段 hGPI 325-339(IWYINCFGCETHAML)和 hGPI
          低毒高效的抗RA关节骨破坏药物具有重要的经济和社                           469-483(EGNRPTNSIVFTKLT) 均由宁波康贝生化有
          会意义。                                               限公司合成;百日咳毒素(批号 180,规格 50 μg)购自美
              资木瓜总苷是从中药皱皮木瓜 Chaenomeles spe‐                 国 List Biological Laboratories 公司;完全弗氏佐剂购自
          ciosa (Sweet) Nakai中提取的有效活性物质。本课题组                 美国Sigma公司;小鼠白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、
                                                             肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4、
          前期研究发现,资木瓜总苷可通过调节肠道菌群来抑
                                                             IL-10 酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent
          制 K/B×N小鼠(血清转移性关节炎模型小鼠)的炎症因
                                                             assay,ELISA)试剂盒(批号分别为 E-EL-M0044c、E-EL-
          子水平,从而改善其关节炎症状 ;同时体外研究也发
                                      [5]
                                                             M3063、E-EL-M0043c、E-EL-M0046c)均购自武汉伊莱
          现,资木瓜总苷中的莽草酸单体成分可通过抑制肥大细
                                                             瑞特生物科技股份有限公司;抗酒石酸酸性磷酸酶
                                             [6]
          胞脱颗粒,从而对软骨损伤起到保护作用 。然而,资木
                                                            (TRAP)染色液、番红固绿染液、兔源 β-肌动蛋白(β-ac‐
          瓜总苷在RA骨破坏中的作用仍不明确。
                                                             tin)抗体(批号 GB11001)和辣根过氧化物酶(HRP)标
              据报道,核因子κB受体活化因子配体(receptor activa-
                                                             记的山羊抗兔 IgG 二抗(批号 GB23303)均购自武汉赛
          tor of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子 κB 受体
                                                             维 尔 生 物 科 技 有 限 公 司 ;兔 源 RANKL 抗 体(批 号
          活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)/
                                                             WL00285)购 自 沈 阳 万 类 生 物 科 技 有 限 公 司 ;兔 源
          骨保护素(osteoprotegerin,OPG)信号通路参与了 RA 的
                                                             RANK 抗 体(批 号 ab200369)、兔 源 OPG 抗 体(批 号
                    [7]
          骨破坏进程 。研究发现,在 RA 患者的血清及关节液
                                                             ab183910)均购自英国 Abcam 公司;兔源活化 T 细胞核
          中,RANKL 的表达水平显著升高,且其表达水平与 RA
                                                             因 子 1(nuclear  factor  of  activated  T  cells  1  protein,
                                  [8]
          的风湿活动度评分呈正相关 。因此,本研究拟使用葡
                                                             NFATC1)抗体(批号8032)、兔源肿瘤坏死因子受体相关
          萄 糖 -6- 磷 酸 异 构 酶(glucose-6-phosphate  isomerase,
                                                             蛋白 6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,
                                                [9]
          G6PI)混 合 多 肽 制 备 DBA/1 小 鼠 RA 模 型 ,并 通 过
                                                             TRAF6)抗体(批号67591)均购自美国CST公司。
          RANKL/RANK/OPG 信号通路探讨资木瓜总苷对 G6PI
                                                             1.3 动物
          诱导的 RA 模型小鼠的骨保护作用及可能的作用机制,                             本研究所用动物为 SPF 级雄性 DBA/1 小鼠,共 70
          为将资木瓜总苷进一步开发为抗RA药物提供实验依据。                          只,鼠龄为9~10周,体质量为(22±1) g,均购自北京华
          1 材料                                               阜康生物科技股份有限公司,动物生产许可证号为
          1.1 主要仪器                                           SCXK(京)2019-0008。所有 DBA/1 小鼠均饲养于三峡
              本研究所用的主要仪器有Centrifuge 5804R型高速                 大学动物实验中心的 SPF 级环境中[实验动物使用许可
          离心机[艾本德(上海)国际贸易有限公司]、MPS 60型光                      证号为 SYXK(鄂)2022-0061]。饲养环境温度为(22±
          学显微镜(德国Leica公司)、ChemiScope 6100型化学发                2) ℃,湿度为(55±2)%,12 h 交替照明。适应性喂养 1
          光成像系统(上海勤翔科学仪器有限公司)、DYCZ-40型                       周后开始正式实验。实验期间动物自由摄食、饮水,垫
          电泳仪(北京六一生物科技有限公司)、NFINITE 200                      料保持干燥清洁。本研究通过了三峡大学动物伦理委


          中国药房  2023年第34卷第9期                                                China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9    · 1043 ·
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