Page 62 - 《中国药房》2023年3期

“2.3.5”项下方法处理后，测定其在415 nm波长处的吸光 菲灵碱的测定无干扰。结果见图2。
度，并采用标准曲线法计算含量。结果，千里光碱含量 0.16 1
0.14
的RSD为1.82%（n＝6），表明本方法重复性良好。 0.12 2
0.10
2.3.9 加样回收率试验 精密称定已知含量的样品 AU 0.08
0.06
0.04
（jsq-15）粉末 6 份，每份 0.5 g，精密称定，按样品中已知 0.02
0
成分含量 1∶1 的质量比加入相应对照品，按“2.3.3”项下 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
方法制备供试品溶液，再按“2.3.5”项下方法处理后，测 t/min
A.混合对照品
定其在415 nm波长处的吸光度，根据标准曲线法计算千 0.040
里光碱的含量，并计算其加样回收率。结果显示，6份样 0.030
品的加样回收率为 98.85%～105.75%，平均加样回收率 AU 0.020 1 2
0.010
为 102.5%（RSD 为 2.61%，n＝6），表明该方法准确度
0
较好。 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
t/min
2.3.10 样品含量测定 取菊三七粉末（过 3 号筛）1 g， B.菊三七样品（jsq-15）
按“2.3.3”项下制备供试品溶液，再按“2.3.5”项下方法处 1：千里光菲灵碱；2：千里光碱
理后，测定其在415 nm波长处的吸光度，根据标准曲线 图2 混合对照品及菊三七样品的HPLC图
法计算千里光碱的含量并得到总生物碱含量（以千里光 2.4.2 混合对照品溶液的制备 精密称定千里光碱对
碱计）。结果显示，15批样品中总生物碱含量（以千里光 照品 10 mg、千里光菲灵碱对照品 12 mg，置于 50 mL 容
碱计）为 0.15%～0.39%，平均含量为 0.28%，详见表 3。
量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，备用。
结合15批药材测定结果，考虑到药材来源的差异，本研
2.4.3 供试品溶液的制备 取不同批次菊三七药材粉
[16]
究以最低测定值设限 ，初步拟定菊三七中总生物碱含
末（过3号筛）各1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加浓
量以千里光碱计不得少于0.15%。
氨试液 2 mL 浸润 1 h，精密加入三氯甲烷 30 mL，密塞，
表3 15 批菊三七样品中总生物碱、千里光碱和千里光 称定质量，加热回流 120 min，再次称定质量，用三氯甲
菲灵碱含量测定结果（x±s，n＝3，%%）
烷补足减失的质量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10 mL，
样品编号 总生物碱 千里光碱 千里光菲灵碱 40 °C 减压回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解并转
jsq-1 0.25±0.01 0.02±0.32 0.04±0.40
jsq-2 0.27±0.01 0.04±0.62 0.06±1.37 移至 5 mL 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用微孔滤膜
jsq-3 0.28±0.02 0.04±0.21 0.02±1.10 （0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
jsq-4 0.18±0.02 0.01±0.11 0.01±0.12 2.4.4 线性关系考察 精密量取“2.4.2”项下混合对照
jsq-5 0.32±0.02 0.05±0.96 0.05±0.53
jsq-6 0.23±0.02 0.03±0.49 0.05±0.50 品溶液 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、5.0 mL，分别置于 10 mL 容
jsq-7 0.26±0.03 0.03±0.61 0.02±0.25 量瓶中，加甲醇定容，摇匀，备用。分别精密吸取上述不
jsq-8 0.33±0.02 0.03±0.34 0.04±0.06 同浓度梯度的线性工作液及对照品母液各 10 μL，按
jsq-9 0.39±0.03 0.02±0.08 0.03±0.32
jsq-10 0.28±0.03 0.02±0.02 0.04±0.00 “2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰。以峰面积
jsq-11 0.23±0.01 0.02±0.01 0.03±0.01 为纵坐标（A）、对照品质量浓度为横坐标（X）绘制标准曲
jsq-12 0.34±0.02 0.02±0.02 0.02±0.00 线，得到千里光碱的回归方程为A＝1.00×10 X－4 896.3
7
jsq-13 0.15±0.00 0.01±0.01 0.02±0.01
jsq-14 0.31±0.01 0.01±0.01 0.02±0.00 （r＝0.999 8），千里光菲灵碱的回归方程为 A＝1.00×
7
jsq-15 0.35±0.02 0.02±0.01 0.02±0.01 10 X－110.8（r＝0.999 7），可知千里光碱和千里光菲灵
2.4 千里光碱、千里光菲灵碱含量测定 碱分别在质量浓度为0.002～0.200、0.002～0.240 mg/mL
采用HPLC法进行测定，具体方法如下。 范围内线性关系良好。
2.4.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Diamon‐ 2.4.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10 μL，
sil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-三乙 按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，重复进样测定6次，并
胺缓冲液（取磷酸 8 mL、三乙胺 14 mL，加水稀释至 记录峰面积。结果显示，千里光碱峰面积的 RSD 为
1 000 mL，用三乙胺调节 pH 至 3.2，即得）（14∶86，V/V）； 1.24%（n＝6），千里光菲灵碱峰面积的 RSD 为 0.77%
流速为 1.0 mL /min；柱温为 25 ℃；检测波长为 215 nm； （n＝6），表明仪器精密度良好。
进样量为 10 μL。取“2.4.2”“2.4.3”项下溶液，按此色谱 2.4.6 稳定性试验 取供试品溶液（jsq-15），在室温下
条件进样测定，记录色谱图。结果显示，理论板数按千 放置0、4、8、12、24 h，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，
里光碱、千里光菲灵碱计均不低于5 000，各待测成分峰 记录峰面积。结果显示，千里光碱峰面积的 RSD 为
与其相邻峰间的分离度均大于 1.5，各成分基线分离良 1.25%（n＝5），千里光菲灵碱峰面积的 RSD 为 0.91%
好，空白溶剂（乙腈-三乙胺缓冲液）对千里光碱、千里光 （n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

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