Page 67 - 《中国药房》2023年3期

mg/mL的单一对照品溶液。 2.2.3 大鼠一般行为学观察 末次雾化 1 h 后，观察各
2.1.3 色谱条件 采用 ACQUITY UPLC HSS T3（100 组大鼠的皮毛光泽度、精神状态以及是否有呼吸急促、
mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱，以0.1%甲酸溶液（A）-乙 搔鼻、打喷嚏等现象。
腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～3 min，23%B；3～7 2.2.4 血清中 IFN-γ、IL-4 和 IgE 含量测定 末次雾化 1
min，23%B→40%B；7～8 min，40%B→42%B；8～11 h后，大鼠摘眼球取血（每只大约取5～8 mL），分别放于
min，42%B→55%B；11～13 min，55%B→65%B；13～14 EP 管中，在室温条件下静置 30 min，然后以 3 000 r/min
离心15 min。用移液枪小心吸取上层血清，按试剂盒说
min，65%B→75%B；14～19 min，75%B→100%B；19～
明书分别测定血清中IFN-γ、IL-4和IgE的含量。
23 min，100%B→23%B）；流 速 为 0.2 mL/min；柱 温 为
2.3 不同批次五味子共有成分与血清药效指标的相关
35 ℃；进样量为5 μL；检测波长为216 nm。
性分析
2.1.4 质谱条件 离子化模式为电喷雾正离子模式；离
2.3.1 灰色关联度分析 将IFN-γ、IL-4和IgE含量作为
子源电压为 5 500 V；离子源温度为 550 ℃；裂解电压为
母本子序列，共有峰的峰面积作为子序列，采用均值变
80 V，碰撞能量为 35 eV；气帘气压力为 35.0 psi；离子源
化 法 进 行 无 量 纲 化 处 理 。 按 照 公 式 ξi(k)=
气体1压力为55.0 psi，离子源气体2压力为5.0 psi；一级 min Di(k)+ ρmaxDi(k)
计算母本子序列与子序列的灰色
质谱母离子扫描范围为质荷比（m/z）80～1 500；信息依 Di(k)+ ρmaxDi(k)
赖式采集（information-dependent acqusition，IDA）设置响 关联系数。式中，Δi（k）为比较序列与参考序列差值的绝对
应值超过100 cps的8个最高峰进行二级质谱扫描，子离 值；ρ 作为分辨系数，一般在 0～1 之间取值，通常选择
子扫描范围为m/z 50～1 500。 [14] 1 n
0.5 。然后按下列公式计算关联度（r）： r = ∑ ξi(k)。
2.1.5 化学成分解析 在 CNKI、PubChem、ChemSpider n k = 1
等数据库中查询五味子中化学成分的名称、分子式、相 式中，n表示各序列的数据数量。当r≥0.7时，表示母本
对分子质量、结构式等信息，建立五味子成分数据库。 子序列与子序列间关联程度较高；当r为0.6～＜0.7时，
[14]
将 UPLC-Q-TOF-MS/MS 分析中化学成分的一级离子 表示母本子序列与子序列间关联程度低 。
2.3.2 Pearson 相关性分析 将各共有峰的峰面积定义
峰、二级碎片离子及保留时间等信息与所建立的数据库
为 X，IFN-γ、IL-4 和 IgE 的含量定义为 Y，采用 SPSS 25.0
进行比对，同时结合对照品数据信息和文献资料对化学
软件对X和Y进行Pearson相关性分析。
成分进行鉴定。
2.4 统计学方法
2.2 不同批次五味子水煎液治疗过敏性哮喘的药效比
采用 IBM SPSS Statistics 21.0 软件进行统计分析。
较研究
实验结果以 x±s 表示。多组间比较采用单因素方差分
2.2.1 试药的制备 取10批五味子样品，分别按“2.1.1”
析，组间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
项下方法制备浸膏。取适量浸膏加水溶解，制成质量浓
3 结果
度为 0.9 g/mL（按生药量计）的灌胃溶液，并记为 C1～
3.1 不同批次五味子水煎液的 UPLC-Q-TOF-MS/MS
C10。
化学成分鉴定结果
2.2.2 大鼠过敏性哮喘模型的建立及给药 取SD大鼠 在正离子模式下采集五味子不同批次样品的质谱
按体质量分层随机分为空白组、模型组、阳性对照药（百 信息，分别提取其基峰离子色谱图（base peak chromato‐
令胶囊）组和 10 批样品给药组，分别编号为 A1～A13 gram，BPC）并进行叠加，BPC 叠加图见图 1。通过与相
组，每组 8 只。除 A1 组外，其余各组大鼠均参照文献 关文献和对照品比对，最终在 10 批样品间共确定 21 个
[12－13]方法造模：分别于实验第1、8、14天腹腔注射新 共有峰（依次记为F1～F21），主要为木脂素类、有机酸类
鲜配制的生理盐水混悬液[含OVA 60 mg（5%）和氢氧化 和倍半萜类化合物（表2）。
铝凝胶 100 mg（10%）]，每次每只大鼠注射 1 mL。并从 ×10 6
×10 7 4.4
2，3 4.0 14
实验第15天起连续16 d将大鼠放入自制雾化箱中，吸入 7 响应值 3.6 16 17 18 19
3.2
含1%OVA的生理盐水进行雾化激发（20 min）。A1组以 6 2.8
2.4
1 12 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
5 采集时间/min
生理盐水代替混悬液进行腹腔注射和雾化激发。于实 4，5 13 14 16 17 18 19 20，21
验第 15 天起，在雾化激发前，A1～A2 组大鼠灌胃给予 响应值 4 6，7 8 9－11 15 S1
3 S2
生理盐水，A3 组大鼠灌胃给予百令胶囊 0.92 g/kg[本研 S3
S4
2 S5
S6
究按成人（体质量60 kg）百令胶囊的临床用药最大剂量 S7
1 S8
S9
9 g，换算成大鼠等效剂量约为0.92 g/kg]；A4～A13组大 S10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
鼠分别灌胃给予10批五味子水煎液1.23 g/kg（以生药量 采集时间/min
计），剂量依据前期预实验结果设置。 图1 10批五味子样品的BPC叠加图和共有峰
中国药房 2023年第34卷第3期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 3 · 317 ·