Page 55 - 《中国药房》2023年3期

2.1.2 混合对照品溶液 分别精密称取适量龙胆苦苷、 獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和苦龙胆酯苷的含量，每个样品
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、苦龙胆酯苷对照品，加甲醇溶解， 均做3组平行实验。结果显示，在头花龙胆和坚龙胆的

制备成上述 4 种成分质量浓度分别为 0.200 0、0.050 0、 根及根茎中均检测到了上述4种成分，但在微籽龙胆根
0.005 0、0.005 0 mg/mL 的混合溶液，经 0.22 μm 有机相 及根茎中未检测到龙胆苦苷。其中，头花龙胆根及根茎
微孔滤膜过滤，收集滤液，即得。 中龙胆苦苷含量与坚龙胆根及根茎中含量相近，是2020
2.2 3种龙胆属植物根及根茎中4种环烯醚萜类成分含 版《中国药典》（一部）“坚龙胆”项下限量标准（1.50%）的
量的测定 4.42 倍；而在微籽龙胆根及根茎中未检测到龙胆苦苷，
但微籽龙胆根及根茎中獐牙菜苦苷、苦龙胆酯苷的含量
2.2.1 HPLC 检 测 条 件 色 谱 柱 为 Eclipse XDB-C18
（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇（A）-水（B）为流动相 分别是坚龙胆根及根茎的 34.12、8.81 倍，是头花龙胆根
进行梯度洗脱（0～15 min，15%A→35%A；15～40 min， 及根茎的9.84、7.45倍。结果见表1。
35%A→80%A；40～60 min，80%A→100%A）；流 速 为 表1 3 种龙胆属植物根及根茎中 4 种环烯醚萜类成分
的含量比较（x±s，n＝3，%%）
1.0 mL/min；柱温为 25 ℃；检测波长为 274 nm（龙胆苦
样品 龙胆苦苷 獐牙菜苷 獐牙菜苦苷 苦龙胆酯苷
苷）、243 nm（獐牙菜苦苷、獐牙菜苷及苦龙胆酯苷）；进 坚龙胆 7.863 0±0.020 6 0.115 5±0.004 3 0.011 1±0.000 6 0.006 0±0.000 1
样量为5 μL。 头花龙胆 6.626 0±0.632 2 0.085 8±0.006 8 0.038 5±0.000 5 0.007 1±0.000 2
微籽龙胆 － 0.026 9±0.000 7 0.378 7±0.001 8 0.052 9±0.001 2
2.2.2 方法学考察 按照相关方法进行方法学考察。
－：未检出
专属性考察结果显示，混合对照品及供试品溶液在相同 2.3 3种龙胆属植物根及根茎的化学成分差异分析
保留时间处均有相似的色谱峰，并且特征峰与杂质分离 运用 UPLC-ESI-Q-TOF-MS 法分析 3 种龙胆属植物
良好、无干扰，表明该方法专属性较好（图略）。以峰面 根及根茎的化学成分差异。
积（A）对各成分进样量（x）进行线性回归，得到龙胆苦 2.3.1 色 谱 及 质 谱 检 测 条 件 采 用 Dionex-C18 （150
苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、苦龙胆酯苷的回归方程分 mm×2.1 mm，3 μm）色谱柱，以甲醇（A）-水（B）为流动

2
别 为 A＝800.04x+40.197（R ＝1.000 0）、A＝1 704.3x－ 相 进 行 梯 度 洗 脱（0～10 min，15%A→27%A；10～20
57.269（R ＝0.999 7）、A＝3 014.0x+6.815 4（R ＝0.999 8）、 min，27%A→35%A；20～40 min，35%A→80%A；40～45
2
2
2
A＝1 763.9x+7.483（R ＝0.999 8），线性范围分别为 min，80%A→100%A）；检 测 波 长 为 243 nm；柱 温 为
1.536～15.36、0.050 50～1.010 00、0.001 63～0.081 60、 25 ℃；流速为0.2 mL/min。采用电喷雾离子源（ESI），在
0.001 57～0.078 40 μg。精密度考察结果显示，4个成分 正离子模式扫描；毛细管电压为4 500 V，雾化器压力为
对照品溶液峰面积的RSD分别为0.44%、1.31%、1.20%、 1.8 bar；干燥气体为氮气，干燥气流速为8 L/min；干燥温

1.25%（n＝6），表明仪器精密度良好。重复性考察结果 度为 220 ℃；离子源温度为 220 ℃；扫描范围为 m/z
显示，供试品溶液中上述 4 个成分含量的 RSD 分别为 50～2 000；碰撞气体为氩气，扫描时碰撞能量为 8 eV；
2.32%、2.02%、1.91%、2.78%（n＝6），表明重复性较好。 六极杆射频电压为70 Vpp，四极杆离子能量为8 eV。准
稳定性考察结果显示，供试品溶液中上述4个成分峰面 确质量数用甲酸钠校正液校正。
积的RSD分别为0.42%、0.49%、1.90%、2.94%（n＝6），表 2.3.2 样品检测及数据处理 取“2.1.1”项下供试品溶
明供试品溶液在室温放置 12 h 内稳定。精密量取适量 液和“2.1.2”项下混合对照品溶液，分别按“2.3.1”项下检

已知含量的样品，共 9 份，分别按已知含量的 80%、 测条件进样测定，分别测得坚龙胆、头花龙胆、微籽龙胆
100%、120%加入龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、苦龙 3 种龙胆属植物的质谱数据，并将测得的数据用 Bruker
胆酯苷对照品（每个浓度3份），并依法测定加样回收率， Compass Data Analysis 4.3 软件进行处理。经课题组前
结果80%、100%、120%加样量样品的平均加样回收率分 期研究及查阅文献发现，环烯醚萜类和 酮类成分在正
别 为 100.9%、98.03%、105.3%、97.70%（RSD 分 别 为 离子模式下响应较好 [12―14] ，因此本研究选择正离子扫摸
2.51%、1.49%、2.33%、1.28%，n＝9），表明该方法准确度 模式，选中质谱图中对应的分子离子峰，即可输出对应

良好。 的分子式。结合对照品相关信息、相同类型化合物的裂
2.2.3 含量测定 取“2.1.1”项下供试品溶液，按“2.2.1” 解规律 [15―17] 、文献报道的质谱数据 [15―22] 进行结构鉴定，并
项下 HPLC 检测条件测定 3 种龙胆属植物中龙胆苦苷、 定性分析样品中的主要活性成分。

中国药房 2023年第34卷第3期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 3 · 305 ·