Page 85 - 《中国药房》2023年1期

4.17～20.83 μg/mL。精密度、重复性及稳定性（24 h）试 350
300
验结果的RSD分别为1.28%、2.01%、2.33%（n＝6）；加样 250
200
回收率试验结果显示，熊果酸的平均加样回收率为 mAU 150 1 3
100 2 5
98.28%（RSD＝2.14%，n＝6）。 50 4
0
2.3.4 样品测定 精密吸取1 mL不同产地枇杷叶的供 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50
t/min
试品溶液，采用紫外分光光度法进行测定，计算样品中 A.混合对照品溶液
总三萜酸含量。每个样品平行测定3次。结果显示，不 350
300 1
同产地枇杷叶总三萜酸的含量差异明显。其中，样品 250 3
200
S14 中总三萜酸的含量最高，S17 中总三萜酸的含量最 mAU 150 2 5
100
低。结果见表2。 50 4
0
2.4 5个三萜酸类成分的含量测定 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50
t/min
采用HPLC法测定枇杷叶样品中5个三萜酸类成分 B.供试品（S14）溶液
的含量。
350
300
2.4.1 溶液的制备 （1）混合对照品溶液的制备：分别 250
精密称取野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸及熊果 mAU 200
150
100
酸对照品各适量，置于同一 25 mL 容量瓶中，加 95% 乙 50
0
醇超声溶解并定容至刻度，制成每 1 mL 分别含 594、 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50
t/min
580、808、302.5、1217.5 μg上述成分的混合对照品溶液， C.空白溶剂
备用。（2）供试品溶液的制备：分别取不同产地枇杷叶样 1：野鸦椿酸；2：山楂酸；3：科罗索酸；4：齐墩果酸；5：熊果酸
品粗粉各约 2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加 图1 系统适用性试验HPLC图
入95%乙醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再 3.189 ng，定量限为 10.631 ng；齐墩果酸的回归方程为
次称定质量，加 95% 乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过， Y＝408.59X－51.659（r＝0.999 7），线性范围为 0.756～
取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，收集滤液，备用。
6.050 μg，检测限为 5.642 ng，定量限为 18.807 ng；熊果
2.4.2 色谱条件与系统适用性试验 采用 Shim-pack
酸的回归方程为Y＝417.29X+5.614 2（r＝0.999 9），线性
Scepter HD-C18-80（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以
范围为 3.044～22.350 μg，检测限为 5.599 ng，定量限为
乙腈（A）-甲醇（B）-0.5% 乙酸铵溶液（C）为流动相进行
18.663 ng。精密度、重复性及稳定性（24 h）试验结果良
梯度洗脱（0～20 min：3%A→15%A，76%B→64%B，21%C；
好（RSD 均小于 2%，n＝6）。野鸦椿酸、山楂酸、科罗索
20～50 min：15%A→20%A，64%B→59%B，21%C）；流
酸 、齐 墩 果 酸 和 熊 果 酸 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为
速为 1.0 mL/min；柱温为 40 ℃；检测波长为 210 nm；进
98.51%、99.32%、99.01%、98.21% 和 101.02%（RSD 均小
样量为 20 μL。取“2.4.1”项下溶液及空白溶剂（95% 乙
于2.5%，n＝6）。
醇）按此色谱条件进样测定，记录色谱图。结果显示，5
2.4.4 样品测定 分别取不同产地枇杷叶样品适量，按
个三萜酸类成分与其相邻峰间的分离度均大于 1.5，理
“2.4.1（2）”项下方法制备供试品溶液，每个样品平行制
论板数按熊果酸计大于 5 000，且空白溶剂对各成分的
备 3 份。将上述 90 份供试品溶液分别按“2.4.2”项下色
测定无干扰。结果见图1。
谱条件测定，并根据“2.4.3”项下回归方程计算含量。结
2.4.3 方法学考察 按文献[11]方法操作进行方法学考
果显示，不同产地枇杷叶中5个三萜酸类成分的含量有
察。以进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线
明显差异。其中，样品 S14 中野鸦椿酸、山楂酸和科罗
性回归获取回归方程；采用 95% 乙醇逐级稀释混合对
照品溶液并进样分析，当信噪比为3∶1、10∶1时分别得检 索酸的含量最高，样品S19中齐墩果酸和熊果酸的含量
测限和定量限。结果显示，野鸦椿酸的回归方程为 最高；样品 S4 中野鸦椿酸、山楂酸含量最低，样品 S7 中
Y＝471.76X－37.818（r＝0.999 9），线性范围为 1.485～ 科罗索酸含量最低，样品S1中齐墩果酸含量最低，样品
11.880 μg，检测限为 1.537 ng，定量限为 5.126 ng；山楂 S3中熊果酸含量最低。并且，有7个产地的枇杷叶中齐
酸的回归方程为 Y＝ 464.63X－50.207（r＝0.999 9），线 墩果酸和熊果酸的总含量低于2020年版《中国药典》（一
性范围为 1.450～11.600 μg，检测限为 2.625 ng，定量限 部）要求（即含齐墩果酸和熊果酸的总含量不少于
[3]
为 8.750 ng；科罗索酸的回归方程为 Y＝ 397.8X+13.565 0.7%） ，分 别 是 S2～S4、S7、S10、S16、S17。 结 果
（r＝0.999 9），线性范围为 2.020～26.160 μg，检测限为 见表3。

中国药房 2023年第34卷第1期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 1 · 75 ·