Page 27 - 《中国药房》2023年1期

表1 孵育不同时间后各组细胞对各制剂的摄取量测定 表2 孵育不同时间后各组细胞胞浆中的荧光强度测定
结果（x±s，n＝3，%%） 结果（x±s，n＝3）
组别 15 min 30 min 60 min 组别 1 h 4 h
空白对照组 0.3±0.1 0.5±0.1 0.6±0.1 空白对照组 0 0
FAM
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siP 组 1.1±1.1 a 1.2±2.1 a 9.2±2.1 a siP 组 8.6±3.9 a 25.2±8.6 ab
FAM
AB4/siP -L组 42.4±2.8 ab 71.8±2.5 abc 96.1±1.7 abcd AB4/siP -c-L组 18.4±4.4 ac 35.2±4.9 abc
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AB4/siP -c-L组 50.9±3.1 abe 90.4±1.8 abce 97.8±1.3 abcde a：与孵育相同时间的空白对照组比较，P＜0.05；b：与相同制剂孵
a：与孵育相同时间的空白对照组比较，P＜0.05；b：与孵育相同时 育1 h时比较，P＜0.05；c：与孵育相同时间的siP FAM 组比较，P＜0.05
间的siP 组比较，P＜0.05；c：与相同制剂孵育15 min时比较，P＜0.05； 3 讨论
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d：与相同制剂孵育30 min时比较，P＜0.05；e：与孵育相同时间的AB4/ 本研究采用乙醇注入法制备了cRGD修饰的靶向脂
siP -L组比较，P＜0.05
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质体，用于共递送水溶性药物 AB4 和基因药物 siP。在
2.3.2 共聚焦激光扫描显微镜观察 采用完全随机 制备过程中笔者发现，加入DSPE-PEG 2000-cRGD后可
方案，利用共聚焦激光扫描显微镜考察荧光标记制剂 降低AB4-c-L和AB4/siP-c-L的电位。其可能原因在于，
在 LLC 细胞内的分布。将 LLC 细胞按每孔 1×10 个 囊泡表面包裹的PEG可在一定程度上覆盖DOTAP的正
6
[14]
®
接种于 Lab-Tek 腔室玻片上，置于 37 ℃、5%CO2 培养 电基团，从而导致脂质体的电位下降 。对于基因药物
箱中孵育 24 h 至细胞贴壁。将细胞分为空白对照组、 siP，由于体内存在大量的核酸酶，一旦游离 siP 进入体
siP FAM 组和 AB4/siP FAM -c-L 组，每组设置 3 个复孔。空白 内，会迅速降解失效。但是经过脂质体包裹后，脂质体
上 PEG 可保护 siP 不被核酸酶代谢，避免负电荷的蛋白
对照组细胞给予常规培养基，给药组细胞分别加入
或红细胞对 siP 的吸附，从而延长其在体内的循环时
siP FAM 、AB4/siP FAM -c-L（siP FAM 的 浓 度 均 为 20 nmol/L，
间 。通过细胞摄取实验结果可知，LLC 细胞对 AB4/
[15]
AB4 的浓度均为 1.6 μmol/L）。将细胞置于培养箱中
siP-c-L 的摄取能力比对游离 siP 更强，AB4/siP-c-L 可在
分别常规培养 1、4 h 后，用 PBS 清洗细胞 3 次，DAPI 染
细胞质内大量富集。其具体的作用机制可能与靶向基
色 10 min，再次用 PBS 清洗 3 次后，封片，于显微镜下观 [16]
团cRGD的肿瘤细胞穿膜作用相关 。
察细胞中的荧光分布。统计学分析方法同“2.3.1”项下。
根据本课题组前期开展的药动学及组织分布实验
结果显示，孵育 1、4 h 后，药物主要分布于细胞质中，
得知，AB4/siP-c-L 给药 12 h 后小鼠血液中 AB4 的浓度
siP FAM 组、AB4/siP FAM -c-L 组细胞的荧光强度均显著高于 已非常低，AB4 已基本分布到肿瘤部位。因此，为充分
空白对照组（P＜0.05），AB4/siP FAM -c-L 组细胞的荧光强 考察 AB4/siP-c-L 中 AB4 的释放行为，本研究选择 48 h
度显著高于 siP FAM 组（P＜0.05），且随着孵育时间的延长 作为考察时间，未选择更长的72 h。在体外释放行为考
各给药组细胞的荧光强度均显著升高（P＜0.05）。结果 察实验中，与AB4溶液相比，AB4/siP-c-L混悬液中AB4
见图5、表2。 的缓释效果明显。其原因可能在于 AB4 包裹于脂质体
DAPI siP FAM Merge DAPI siP FAM Merge

空白对照组

siP FAM 组

AB4/siP -c-L组
FAM

t＝1 h t＝4 h
图5 孵育不同时间后各组细胞的共聚焦激光扫描显微图（×40）

中国药房 2023年第34卷第1期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 1 · 21 ·