Page 30 - 《中国药房》2023年1期

AMPK protein were all decreased significantly （P＜0.05）； mRNA and protein expressions of ADAMTS-4， ADAMTS-5， MMP-3
and MMP-13 and the phosphorylation levels of mTOR protein were significantly increased in cartilage tissues （P＜0.05）. Compared
with model group， the pathological morphology of cartilage was improved significantly in each administration group， and above
score or indexes were reversed significantly （P＜0.05）. Compared with XBN group， the degree of cartilage lesions in rats was
further alleviated in XBN+ metformin group， and the levels of above score or indicators were further improved （P＜0.05）.
CONCLUSIONS XBN can ameliorate cartilage injury in KOA model rats， promote cartilage synthesis and reduce cartilage
degradation， the mechanism of which may be associated with activating AMPK/mTOR signaling pathway.
KEYWORDS Xibining prescription； knee osteoarthritis； AMP-activated protein kinase； mammalian target of rapamycin； cartilage

膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是一种全关 国GE公司）等。
[1]
节疾病，该病病因复杂，软骨退变是其核心病理环节 。 1.2 主要药品与试剂
软骨退变主要是由于软骨细胞合成代谢及细胞外基质 制狗脊、山萸肉、生薏苡仁、川牛膝、制何首乌、生甘
（extracellular matrix，ECM）分解代谢平衡失调所致，因 草药材均购自康美药业股份有限公司（批号分别为
此，维持软骨组织自身的代谢平衡在 KOA 的治疗中具 211201171、220101031、220202271、220200041、211003211、
有十分关键的作用，对于延缓 KOA 发展进程至关重 211200251），巴戟天、炒白芍（批号分别为 220100129、
[2]
要 。研究显示，以血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4 220400529）购自康美（亳州）世纪国药有限公司，淡附片
（disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin （批号22030206）购自康美滕王阁（四川）制药有限公司，
motifs 4，ADAMTS-4）、ADAMTS-5、基质金属蛋白酶 3 桂枝（批号220101）购自普宁市泽群中药饮片有限公司，
（matrix metalloproteinase3，MMP-3）、MMP-13 为代表的 紫河车（批号 211001）购自安徽道源堂中药饮片有限公
胶原水解酶，对关节软骨具有破坏作用 [3―4] ；而聚集蛋白 司。上述药材经南京中医药大学附属医院骨伤科王培
聚糖（Aggrecan）对关节软骨具有保护作用 [5―6] 。另外，越 民教授鉴定为真品。二甲双胍（AMPK 激动剂，批号
来越多的研究表明，调控腺苷酸活化蛋白激酶（AMP- R000310）购自上海易恩化学技术有限公司；番红 O-固
activated protein kinase，AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋 绿染色试剂盒（批号YM1011）购自南京伊尔美生物科技
白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路对 有 限 公 司 ；兔 源 ADAMTS-4 多 克 隆 抗 体 、兔 源
软骨具有保护效应 [7―9] 。 ADAMTS-5 多克隆抗体（批号分别为 A02899、A02802-
基于 KOA 中医学“寒、瘀、虚”的病机特点，南京中 1）均购自美国 Boster 公司；兔源 Aggrecan 多克隆抗体、
医药大学附属医院骨伤科王培民教授研制了中药复 兔源 MMP-3 多克隆抗体、兔源 MMP-13 多克隆抗体、小
方——膝痹宁方（XBN），该方由制狗脊、山萸肉、生薏苡 鼠源 GAPDH 单克隆抗体（批号分别为 13880-1-AP、
仁、川牛膝、制何首乌、生甘草等11味中药组成，且已获 17873-1-AP、18165-1-AP、60004-1-Ig）均购自美国 Pro‐
国家专利（专利号为 CN201010514325），在临床上主要 teintech 公司；兔源 AMPK 单克隆抗体、兔源磷酸化
用于治疗骨关节退行性疾病导致的慢性疼痛，疗效显 AMPK（p-AMPK）单克隆抗体、mTOR单克隆抗体、兔源
著 [10―11] 。本课题组前期研究也发现，XBN 可改善 KOA 磷 酸 化 mTOR（p-mTOR）单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为
[12]
模型大鼠的滑膜炎症和疼痛 ，但具体作用机制尚不明 2532S、50081S、2983S、5536S）均购自美国 CST 公司；辣
确。基于此，笔者拟基于 AMPK/mTOR 信号通路探讨 根酶素标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（批号
XBN改善KOA的作用机制，以期为XBN的临床应用提 K1223）均购自美国 APExBIO 公司；BCA 试剂盒（批号
供实验基础。 P0012）购 自 上 海 Beyotime 公 司 ；青 霉 素 钠（批 号
1 材料 F0112104）购自华北制药股份有限公司。
1.1 主要仪器 1.3 实验动物
本研究所用主要仪器包括AB7500型荧光定量聚合 本研究所用实验动物为 SPF 级 SD 雄性大鼠，共 36
酶链式反应（qPCR）系统（美国 ABI 公司），HistoCore 型 只，体质量 190～200 g，2 月龄，由浙江省医学科学院提
组织切片机、TP1020型组织脱水机、KD-BMⅢ型组织包 供，动物生产许可证号为SCXK（浙）2019-0002。所有大
埋 机 、MI-3000B 型 倒 置 显 微 镜（德 国 Leica 公 司）， 鼠均分笼饲养于光/暗各 12 h、室温（25±2） ℃、相对湿
BioPhotometer-Plus 型多功能核酸蛋白检测系统（德国 度（60±5）%的动物房内，自由摄食、饮水。动物实验方
Eppendorf 公司），170-3930 型垂直凝胶电泳及转膜系统 案经南京中医药大学动物伦理委员会审核批准，批准号
（美国Bio-Rad公司），LAS4000型凝胶成像发光系统（美 为ACU210101。

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