Page 24 - 《中国药房》2023年1期

白头翁皂苷B4和PD-L1 siRNA共递送cRGD修饰靶向脂质体的

制备及体外细胞摄取研究
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万安平 ，张 婧 ，周 雄 ，冯育林 ，刘 骏 ，何 瑶 ，李 翔 （1.江西中医药大学中药固体制剂制造技术
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国家工程研究中心，南昌 330006；2.江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室，南昌 330004）
中图分类号 R943 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）01-0018-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.01.04
摘 要 目的 制备白头翁皂苷 B4（AB4）和程序性死亡配体 1（PD-L1）小干扰 RNA（siP）共递送环精氨酰甘氨酸天冬氨酸序列
（cRGD）修饰靶向脂质体（AB4/siP-c-L），并考察其体外细胞摄取行为。方法 采用乙醇注入法制备cRGD修饰的AB4靶向脂质体
（AB4-c-L），将AB4-c-L与20 nmol/L的siP 等体积混合，通过静电吸附得到AB4/siP-c-L。分别采用激光散射粒径测定仪、透射电
子显微镜、超滤离心法、透析法、琼脂糖凝胶电泳法考察AB4/siP-c-L的粒径、Zeta 电位、形态、包封率、药物含量、体外释放行为、血
清稳定性。分别采用流式细胞术和共聚焦激光扫描技术评价小鼠Lewis肺癌细胞LLC对AB4/siP-c-L的摄取及其在细胞内的分
布情况。结果 AB4/siP-c-L的平均粒径为（187.4±3.1） nm，Zeta电位为（33.5±1.4） mV，形态呈类球形，AB4的包封率和含量分别为
（95.2±0.4）%、（1.0±0.2） mg/mL；AB4/siP-c-L可较好地包裹siP，并具有较好的血清稳定性、pH敏感性以及缓释特性。LLC细胞对
AB4/siP-c-L的摄取率显著高于游离药物，并能实现细胞质内富集。结论 AB4/siP-c-L可有效实现AB4与基因药物siP共载，且对
LLC细胞具有一定的体外靶向性。
关键词 白头翁皂苷B4；程序性死亡配体1；小干扰RNA；脂质体；细胞摄取

Preparation and cellular uptake study of anemoside B4 and PD-L1 siRNA co-delivered cRGD-modified
targeting liposomes
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WAN Anping ，ZHANG Jing ，ZHOU Xiong ，FENG Yulin ，LIU Jun ，HE Yao ，LI Xiang （1. National
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Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine， Jiangxi University of
Chinese Medicine， Nanchang 330006， China；2. Key Laboratory of Modern Preparation of TCM of Ministry of
Education， Jiangxi University of Chinese Medicine， Nanchang 330004， China）
ABSTRACT OBJECTIVE To prepare anemoside B4 （AB4） and programmed cell death ligand 1 （PDL1） siRNA （siP） co-
delivered cRGD-modified targeting liposomes （AB4/siP-c-L）， and to study the cellular uptake in vitro. METHODS The cRGD-
modified AB4-loaded targeted liposomes （AB4-c-L） were prepared by ethanol injection. AB4-c-L was mixed with 20 nmol/L siP in
the same volume and AB4/siP-c-L was obtained through electrostatic adsorption. The particle size， Zeta potential， morphology，
encapsulation efficiency and drug content， in vitro release behavior and serum stability of AB4/siP-c-L were investigated by laser
scattering particle size tester， transmission electron microscopy， ultrafiltration centrifugation， dialysis and agar-gel electrophoresis
block test. Cellular uptake of AB4/siP-c-L by Lewis lung cancer cells LLC and its intracellular localization were evaluated by flow
cytometry and confocal laser scan technique. RESULTS The average particle size of AB4/siP-c-L was （187.4±3.1） nm， and the
Zeta potential was （33.5±1.4） mV. AB4/siP-c-L was spheroidal in shape. The encapsulation efficiency and content of AB4 were
（95.2±0.4） % and （1.0±0.2） mg/mL， respectively. AB4/siP-c-L could better package siP， and exhibited good serum stability，
obvious pH sensitivity and sustained release property. The uptake rate of AB4/siP-c-L by LLC cells was significantly higher than
that of free drug， and was able to accumulate in cytoplasm. CONCLUSIONS AB4/siP-c-L can effectively realize the co-loading of
AB4 and gene drug siP， which has certain in vitro targeting to LLC cells.
KEYWORDS anemoside B4； PD-L1； siRNA； liposome； cellular uptake

Δ 基金项目 国家自然科学基金资助项目（No.82260695）；江西省 白头翁始载于《神农本草经》，为毛茛科植物白头翁
[1]
自然科学基金项目（No.20212ACB206004）；江西中医药大学科技创新 Pulsatilla chinensis （Bunge） Regel 的干燥根 。白头翁
团队（No.CXTD22001）；江西省青年井冈学者项目（No.QNJG2018077）； 皂苷 B4（anemoside B4，AB4）是白头翁中的五环三萜皂
大学生创新创业训练计划项目（No.双创院发〔2022〕2号） [2]
苷成分之一，具有抗肿瘤、调节免疫等药理作用 。然而
＊ 第一作者 硕 士 研 究 生 。 研 究 方 向 ：中 药 学 。 E-mail：
2824511606@qq.cm AB4为水溶性药物，在血浆中的半衰期短、代谢快，在肿
[3]
瘤部位的富集量较少，这在一定程度上限制了其应用 。
# 通信作者 教授，硕士生导师，博士。研究方向：药物新剂型与新
技术。E-mail：sterlinghawk@163.com 程序性死亡配体1（programmed cell death ligand 1，PD-L1）

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