Page 98 - 《中国药房》2022年24期
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耐受药物不良反应者；（2）1 周内服用对 DLM 药物浓度                       色谱条件。
          有影响的药物者，如利福平等强细胞色素 P450（cyto‐                           本课题组前期在扫描母离子时发现，DLM 易形成
                                    [8]
                                                                   +
          chrome P450，CYP）3A4诱导剂 ；（3）妊娠期或哺乳期妇                 [M+H] 峰，且在 MRM 正离子模式下的灵敏度较高；随
          女。本研究方案经武汉市肺科医院医学伦理委员会审                             后，本课题组对离子化电压、雾化气温度、气帘气压力、
          查批准，批件号为武肺伦理（2021）20号。                              碰撞气压力、碰撞能量、去簇电压等质谱参数进行优化，
          2.6.2 用药情况 本研究共纳入我院 2021 年 4－10 月                   以进一步提高灵敏度并降低基线信噪比，最终得到了
          收治的MTB-TB患者6例。其中，男性2例、女性4例；平                       “2.2”项下质谱条件。
          均年龄为（28.8±11.7）岁；所有患者均口服 DLM 片，每                        研究指出，以甲醇沉淀蛋白所得样品的基质效应明
                                                                [15]
          次100 mg，每天2次，连续服用1周以上。                              显 。为此，本课题组首先在满足DLM血药浓度定量分
          2.6.3 检测方法及结果 使用乙二胺四乙酸抗凝管采                          析的前提下适当增加甲醇的体积，以减少基质效应的影
          集患者末次服药后4 h的静脉血，于4 ℃下以3 000 r/min                   响，最终确定按血浆-甲醇（1∶9，V/V）进行蛋白沉淀。随
          离心 10 min，取上层血浆于离心管中，置于－80 ℃冰箱                      后，本课题组采用梯度洗脱方式，通过调整流速、优化水
          中保存，备用。取患者血浆样品，按照“2.4”项下方法处                         相和有机相的比例，尽可能地减少内源性物质的干扰。
          理后，再按照“2.1”“2.2”项下色谱与质谱条件进样分析，                          本课题组前期分别采用内标法（以 DLM 同位素为
          记录峰面积并使用随行标准曲线计算 DLM 的血药浓                           内标）和外标法进行DLM的定量分析，结果发现，2种方
          度。结果显示，6例患者体内DLM的血药浓度为0.61～                         法并无明显差别。结合相关文献              [16―17] 推荐，为缩短临床
          2.76 μg/mL，平均（1.67±0.74）μg/mL。                      大样本监测时间并降低检测成本，本研究最终选择了外
          3 讨论                                                标法，以随行标准曲线计算 MDR-TB 患者体内 DLM 的

              DLM 是一种霉菌酸生物合成抑制剂，对复制和休                         血药浓度。
                                                                             [18]
          眠的结核分枝杆菌以及细胞内外的结核杆菌均具有抑                                 对比 Meng 等 所建的方法，本研究所建方法需要
          制活性   [10―11] 。有研究指出，DLM联合其他活性药物用于                  的样本量较少，仅需40 μL的血浆即可完成检测；同时，
          难治性耐药TB，可实现较高的培养阴性率，且具有良好                           以甲醇沉淀蛋白进行血浆样品前处理，操作较为简便；
          的安全性 。然而，在 DLM 上市后不久，临床出现了耐                         在流动相组成方面，本法使用了成本较低且组成简单的
                  [12]
          DLM 结核杆菌感染患者，因此对该药的耐药性进行系                           甲醇-甲酸溶液；此外，DLM的出峰时间为1.9 min，检测
                         [13]
          统监测很有必要 。为了最大限度地延缓和减少耐                              时间不超过4 min，适用于临床大样本的快速检测。
          DLM 结核杆菌的出现，选择综合治疗方案并于治疗期                               综上所述，本研究成功建立了检测人血浆中 DLM
          间进行 TDM 十分重要，通过监测 DLM 血药浓度，可及                       浓度的 LC-MS/MS 法，可用于检测 MDR-TB 患者体内
          时调整给药剂量，有助于实现个体化给药、降低耐药率、                           DLM 的血药浓度。由于目前暂无明确的 DLM 有效治
          提高临床疗效。                                             疗浓度范围，且本研究的样本量较小，故后期本课题组
              TDM 常用的分析技术主要有光谱法、色谱法和免                         将扩大样本量进行检测，同时收集该药有效性和安全性
          疫学检测技术等，从药物专属性上推荐采用LC-MS/MS                         的相关数据，完善临床药动学研究。
          和高效液相色谱（HPLC）技术 。由于 DLM 在患者体                        参考文献
                                    [14]
          内的血药浓度较低，HPLC 技术已不能满足临床监测需                          [ 1 ]  ESPINOSA-PEREIRO  J，SÁNCHEZ-MONTALVÁ  A，
          求，而LC-MS/MS技术专属性强、灵敏度高，可降低内源                             AZNAR M L，et al. MDR tuberculosis treatment[J]. Me‐
                                                                   dicina（Kaunas），2022，58（2）：188.
          性物质和其他药物的干扰，加之检测速度较快，故适用
                                                              [ 2 ]  World  Health  Organization.  Global  tuberculosis  report
          于 DLM 血药浓度的大样本监测。基于此，本研究建立
                                                                   2020[R]. Geneva：WHO，2020.
          了检测 DLM 血药浓度的 LC-MS/MS 法并将其应用于
                                                              [ 3 ]  MIRZAYEV F，VINEY K，LINH N N，et al. World Health
          临床。
                                                                   Organization recommendations on the treatment of drug-
              在流动相的选择中，为了弱化色谱峰拖尾并提高检
                                                                   resistant tuberculosis，2020 update[J]. Eur Respir J，2021，
          测的准确性，本课题组分别考察了流动相中加入甲酸或                                 57（6）：2003300.
         （和）甲酸铵后的出峰情况，结果显示，在水相中加入甲                            [ 4 ]  PECORA F，DAL CANTO G，VERONESE P，et al. Treat‐
          酸，所得色谱峰的峰形较好；随后，本课题组依次以                                  ment of multidrug-resistant and extensively drug-resistant
          0.1%、0.2%甲酸溶液为水相，考察了两者的分离效果，最                            tuberculosis in children：the role of bedaquiline and dela‐
          终选择了 0.1% 甲酸溶液作为水相，并确定了“2.1”项下                           manid[J]. Microorganisms，2021，9（5）：1074.


          · 3032 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24                            中国药房  2022年第33卷第24期
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