Page 96 - 《中国药房》2022年24期
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[5]
          用于MDR-TB成年患者的治疗 。                                   分析的 DLM 离子对为 m/z 535.0→352.0，碰撞能量为
              治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，TDM）         38.1 eV；去簇电压为 124.6 V；用于定性分析的 DLM 离
          是用于指导个体化诊疗的手段之一，其旨在通过血药浓                            子对为m/z 535.0→356.9，碰撞能量为26.3 eV，去簇电压
          度来调整药物剂量以提高治疗效果、降低不良反应发生                            为114.0 V。
                                      [6]
          风险，同时最大限度地减少毒性 。DLM是一种双环硝                           2.3 对照品溶液和质控样品的制备
          基咪唑类化合物，为新型抗结核药，可通过在细胞内生                                精密称取 DLM 对照品 10 mg，溶于 DMSO 中，配制
                                                [7]
          成一氧化氮来发挥抗结核分枝杆菌的作用 。研究指                             成质量浓度为1 mg/mL的储备液，置于－20 ℃冰箱中保
          出，DLM的疗效具有浓度依赖性，血药浓度过低可能导                           存。取适量储备液，用 DMSO 稀释，得质量浓度分别为
                                                    [8]
          致疗效不佳，血药浓度过高则可能引发不良反应 。因                            1、5、10、20、40、80、160 μg/mL 的系列标准溶液和 1、2、
          此，本文从临床实际需求出发，建立了快速、准确的高效                           20、120 μg/mL的质控溶液。精密量取空白血浆95 μL，
          液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法，并将其用于检测                        分别加入上述系列标准溶液各5 μL，制成质量浓度分别
          TB 患者体内 DLM 的血药浓度，以期为临床用药提供                         为 0.05、0.25、0.5、1、2、4、8 μg/mL 的系列标准曲线血浆
          指导。                                                 样品；同法制备质量浓度分别为0.05、0.1、1、6 μg/mL的
          1 材料                                                质控血浆样品，备用。
                                                              2.4 血浆样品的处理
          1.1 主要仪器
                                                                  精密吸取待测血浆样品 40 μL，置于 1.5 mL 离心管
              本研究所用主要仪器包括 4500MD 型 LC-MS/MS
                                                              中，精密加入甲醇 360 μL，振荡混匀 1 min 后，于 4 ℃下
          系统（美国AB Sciex公司），5810R型台式高速大容量离
                                                              以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液进行 LC-MS/MS
          心机、5424R 型微量台式高速冷冻离心机（德国 Eppen‐
                                                              分析。
          dorf 公司），Milli-Q Reference 型超纯水系统（美国 Milli‐
                                                              2.5 方法学考察
          pore公司），XSR105DU型十万分之一分析天平[梅特勒-
                                                                  按照 2020 年版《中国药典》（四部）通则的相关要求
          托利多仪器（上海）有限公司]等。
                                                              进行方法学考察 。
                                                                            [9]
          1.2 主要药品与试剂
                                                              2.5.1 专属性考察 取 6 份不同来源的空白血浆、空白
              DLM 片（国药准字 J20180086，规格 50 mg）购自日
                                                              血浆+DLM对照品（0.5 μg/mL）和服用DLM患者的血浆
          本 Otsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.；DLM 对照品（批号
                                                              样品，分别按“2.4”项下方法处理后，再按“2.1”“2.2”项下
          C08A11L110842，纯度 99%）购自上海源叶生物科技有
                                                              色谱与质谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示，在
          限公司；甲醇、甲酸、二甲基亚砜（DMSO）均为色谱纯，
                                                              上述条件下，DLM的保留时间约为1.9 min，血浆中的内
          其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
                                                              源性物质不影响DLM的测定，表明该方法专属性良好，
          1.3 空白血浆
                                                              详见图1（空白血浆样品图略）。
              空白血浆采集于武汉市肺科医院进行体检的健
                                                              2.5.2 线性关系和定量下限的考察 取“2.3”项下系列
          康者。
                                                              标准曲线血浆样品，按照“2.4”项下方法处理后，再按照
          2 方法与结果                                            “2.1”“2.2”项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积。
          2.1 色谱条件                                            以 DLM 峰面积为纵坐标（y）、DLM 质量浓度为横坐标
              以 Phenomenex  Synergi   Fusion-RP（50  mm×32    （x），用最小加权法（加权系数为 1/x）进行线性回归，得
                                   TM
                                                                                            2
          mm，4 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-0.1% 甲酸溶液（B）为                   DLM 的回归方程为 y＝1.745 45×10 x+20 346.322 71
                                                                                               6
          流动相进行梯度洗脱（0～0.5 min，40%A；0.5～0.6 min，              （r＝0.999 5）。结果表明，DLM 检测质量浓度的线性范
          40%A→90%A；0.6～2.9  min，90%A；2.9～3.0  min，90%A→      围为0.05～8 μg/mL，定量下限为0.05 μg/mL。
          40%A；3.0～4.0 min，40%A）；柱温为 40 ℃；流速为 0.3             2.5.3 准确度与精密度试验 取“2.3”项下定量下限质
          mL/min；进样量为1 μL。                                    量浓度（0.05 μg/mL）和低、中、高质量浓度（0.1、1、6
          2.2 质谱条件                                            μg/mL）的质控血浆样品，按照“2.4”项下方法处理后，再
              离 子 源 为 电 喷 雾 离 子 源（electrospray  ionization，   按照“2.1”“2.2”项下色谱与质谱条件连续进样5次，考察
          ESI），以多反应监测（multi-reaction monitoring，MRM）模         日内精密度；连续测定 3 d，考察日间精密度；以实测质
          式进行正离子扫描；离子化电压为5 500 V；雾化气温度                        量浓度与理论质量浓度进行比较，考察准确度。结果显
          为 600 ℃；气帘气压力为 25 psi；碰撞气压力为 6 psi；喷                示，该方法日内和日间精密度的 RSD 均小于 10%，准确
          雾气压力为 45 psi；辅助加热气压力为 55 psi；用于定量                   度为92.7%～104.9%，详见表1。


          · 3030 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24                            中国药房  2022年第33卷第24期
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