Page 41 - 《中国药房》2022年24期
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阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种神             号7074P2）购自美国CST公司；BCA法蛋白测定试剂盒
          经系统退行性疾病，患者发病多隐匿，且其症状可随年                          （批号 K20316）购自北京全式金生物技术股份有限公
          龄增长而不断加重，临床上以记忆认知障碍、情绪多                            司；肠道菌群测定所用 Agencourt AMPure XP 核酸纯化
          疑、性格古怪、行为异常、智力下降等表现为主要特征，                          试剂盒（批号 A63880）购自美国 Beckman Coulter 公司；
                        [1]
          但具体病因未知 。据世界卫生组织估计，到 2050 年                        其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
          全球老年痴呆症患者数将突破1.5亿，其中AD患者约占                         1.3 实验动物
            [2]
          2/3 。随着社会节奏的加快和人口老龄化的不断加剧，                             SPF级APP/PS1转基因阳性（简称“APP转基因”）及
          AD 患者比例不断增高，给患者家庭和社会带来了沉重                          APP/PS1 转基因阴性（简称“APP 野生型”）雄性小鼠，5
              [3]
          负担 。                                               月龄，体质量为 20～25 g，购自斯贝福（北京）生物技术
              本课题组前期研究发现，抑郁症可能是重要的 AD                        有限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK（京）2019-
          致病危险因素，并且抑郁症状在 AD 临床诊断之前就已                         0010。所有小鼠均饲养于温湿度适中的隔离系统内，予
              [4]
          出现 。中医理论认为，在补肾填精的基础上，调畅气机                          清洁 SPF 级饲料喂养，自由摄食、饮水。本研究方案通
          有助于 AD 的防治 。地黄饮子出自金元四大家之一刘                         过辽宁中医药大学实验动物伦理委员会审核，批准号为
                         [5]
          完素的《宣明论方》，以温补下元为主，摄纳浮阳并佐以                          21000042021116。
          开窍化痰 。该方用熟地黄、山萸肉滋补肾阴，肉苁蓉、                          2 方法
                  [6]
          巴戟天温补肾阳；配合附子和肉桂的辛热，助滋养下元、                          2.1 药液的制备
          吸收浮阳、引火归原；石斛、麦冬和五味子润肺补肾，金                              按“1.2”项下处方量称取地黄饮子各饮片，加适量水
          水相生，滋水以降火；石菖蒲与远志、茯苓开窍化痰；再                          煎煮，以大火煮沸后，再以文火煎煮约 20 min，滤过；药
                                                    [7]
          以姜枣调和诸药，共奏填精补髓、化浊开窍之功效 。地                          渣再次同法煎煮，滤过；合并两次滤液，于室温下浓缩成
          黄饮子是近年来临床中医辅助治疗 AD 的经典方，可显                         质量浓度为1 g/mL（以生药量计，下同）的中剂量灌胃药
          著改善AD患者的认知、学习和记忆能力，具有良好的临                          液；用水稀释制成质量浓度为0.5 g/mL的低剂量灌胃药
          床疗效 。有研究证实，肠道菌群可通过肠脑轴这一途                           液，或进一步浓缩成2 g/mL的高剂量灌胃药液，备用。
                [7]
          径调节大脑功能，调控神经递质或代谢产物生成，促进                               取盐酸多奈哌齐片，粉碎，以水为溶剂，先制成质量
          大脑神经细胞凋亡，从而发挥神经保护作用，与AD的发                          浓度为1 mg/mL的药液（以主药计，下同），再用水稀释，
          生发展密切相关 。基于此，本研究拟基于肠脑轴，从肠                          得质量浓度为0.03 mg/mL的灌胃药液，备用。
                        [8]
          道菌群、细胞凋亡、神经保护的角度开展相关实验，旨在                          2.2 分组、造模与给药
          为进一步阐释该方治疗AD的潜在机制提供实验依据。                               取APP转基因小鼠30只，随机分成APP/PS1阳性模
          1 材料                                               型组、地黄饮子高剂量组、地黄饮子中剂量组、地黄饮子
          1.1 主要仪器                                           低剂量组、西药组，每组6只；另取APP野生型小鼠6只，
              本研究所用主要仪器包括 WMT-100S 型 Morris 水                设为 APP/PS1 阴性正常组。适应性喂养 1 周后，地黄饮
          迷宫视频分析系统（成都泰盟软件有限公司），BX-50型                        子高、中、低剂量组小鼠分别灌胃地黄饮子 48、24、12
          光学显微镜（日本 Olympus 公司），801 型形态学图像分                   g/kg（取“2.1”项下 0.5、1、2 g/mL 地黄饮子药液，灌胃体
          析系统（南京捷达实验设备有限公司），164-5050型电泳                      积约为0.72 mL），西药组小鼠灌胃盐酸多奈哌齐0.8 mg/kg
          仪、Trans-Blot Turbo 型全能型蛋白快速转膜仪（美国                 （取“2.1”项下盐酸多奈哌齐药液，灌胃体积约为 0.72
          Bio-Rad公司），Tanon 5200型全自动化学发光图像分析                  mL），APP/PS1 阳性模型组和 APP/PS1 阴性正常组小鼠
          系统（上海天能科技有限公司），Miseq PE300 型高通量                    灌胃同体积生理盐水，每天1次，连续28 d。各药物组剂
          测序平台（美国Illumina公司）等。                               量设置依据如下：地黄饮子按 70 kg 成人单日临床剂量
          1.2 主要药品与试剂                                        143 g（以生药量计），参照《动物实验方法学》以人与小鼠
              地黄饮子组方为熟地黄30 g，姜枣3 g，巴戟天、山萸                    体表面积比换算得小鼠等效剂量为24 g/kg，以此作为中
          肉、石斛、肉苁蓉、炮附子、茯苓、石菖蒲、远志、肉桂、麦                        剂量，其2倍作为高剂量，其1/2作为低剂量；盐酸多奈哌
          冬、五味子各10 g。上述各中药饮片（产地为安徽）均购                        齐按70 kg成人单日临床剂量5 mg，参照《动物实验方法
          自国药控股国大药房有限公司，由辽宁中医药大学药学                           学》以人与小鼠体表面积比换算得小鼠等效剂量为 0.8
          院张建逵教授鉴定均为真品。                                      mg/kg，以此作为给药剂量。
              盐酸多奈哌齐片（批号 139210401，规格 5 mg）购自                2.3 Morris水迷宫实验
          卫 材（中 国）药 业 有 限 公 司 ；兔 源 Bcl-2 抗 体（批 号                 末次给药后，所有小鼠进行Morris水迷宫实验。前
          BA0412）、鼠源 Bax 抗体（批号 A00183）、兔源脑源性神                4天为定位航行实验：在第3象限中心放置逃生平台（液
          经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）抗     面高出平台2 cm），将小鼠面对池壁，分别从4个不同的
          体（批号 PB9075）均购自武汉博士德生物工程有限公                        起始点（不同象限）放入水中，引导其在90 s内找到平台
          司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG二抗（批                       并停留 10 s，记录其找到平台所用时间，作为逃避潜伏


          中国药房  2022年第33卷第24期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24    · 2979 ·
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