Page 36 - 《中国药房》2022年24期
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天智颗粒是根据天麻钩藤饮研制而成的一种中成                           min，98%B→10%B；30～40  min，10%B）；流 速 为 0.3
            [1]
          药 ，主要由天麻、钩藤、石决明、杜仲、桑寄生、茯神、首                         mL/min；柱温为40 ℃；进样量为10 μL。质谱条件如下：
          乌藤、槐花、栀子、黄芩、川牛膝以及益母草12味中药组                          使用电喷雾离子源，在正离子模式下进行全扫描检测，
          成。按君、臣、佐、使理论，各药相辅相成，使天智颗粒具                          扫描范围 m/z 50～1 000；涡旋喷雾温度为 550 ℃；喷雾
                                            [2]
          有平肝潜阳、补益肝肾、益智安神之功效 。现代药理研                           电压为 80 eV；信息关联数据采集模式下，碰撞能量为
          究表明，天智颗粒可以通过提高胆碱能神经功能和抗氧                           （30±15）eV；喷雾气体1的压力为50 psi；加热升温气体
          化酶活性，抑制脑内兴奋性氨基酸的神经毒性，来改善                            2的压力为50 psi；窗口气体的压力为30 psi；喷雾电压为
                           [3]
          血管性痴呆的症状 ，临床主要用于治疗肝阳上亢的中                            5 500 eV；TOF-MS 和 TOF-MS/MS 的累积时间分别为
                                     [4]
          风引起的智力减退、认知障碍等 ，但其药效物质尚不明                           250、80 ms。
          确，且关于天智颗粒的化学成分分析的报道亦较少。因                            2.2 天智颗粒提取液的制备
          此，有必要进一步研究该药所含的化学成分，进而明确                                精密称定天智颗粒 7.5 g，加入 50% 甲醇 50 mL 溶
          其药效物质基础，建立科学的用药依据和质量控制方法。                           解，超声（功率120 W，频率40 kHz）处理30 min，以12 000
              超高效液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间-串联质                        r/min 离心 10 min，将上清液经 0.22 μm 滤过，取 10.0 μL
          谱（UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS）技术相较于普通的高效                   滤液进行UPLC-Q-TOF-MS/MS分析，鉴定其化学成分。
          液相色谱技术而言，可快速得到目标分析物的分子离子                            2.3 动物实验
          峰和碎片离子等信息，可以实现脱离标准品而对样品中                                将大鼠随机分为对照组和给药组，每组 5 只。给药
          多成分同时进行定性分析。目前，该技术被广泛用于代                            组大鼠灌胃天智颗粒水溶液（1.5 mg/g），对照组大鼠灌
          谢组学和化学成分、入血成分等分析的研究中，且在中                            胃等体积生理盐水，每日 2 次，给药间隔 8 h，连续给药
                                           [5]
          药和中药制剂研究领域具有显著优势 。基于此，本研                            7 d。末次给药1 h后，腹腔注射戊巴比妥（0.001 5 mL/g）
          究采用 UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS 技术对天智颗粒的化                  麻醉大鼠，于腹主动脉采集血样，以 3 000 r/min 离心 30
          学成分及入血成分进行定性分析，以期为阐明天智颗粒                            min，取上层血清保存在－80 ℃冰箱中。
          的药效物质基础提供参考。                                        2.4 血清样本的处理与分析
          1 材料                                                    为避免个体差异带来的影响，将对照组和给药组大
          1.1 主要仪器                                            鼠的血清分别进行组内等量混合。分别取两组的等量
              本研究所用主要仪器包括 LC30AD 型 UPLC 仪（日                   混合血清各0.3 mL，加入乙腈1.5 mL，涡旋5 min除去蛋
          本Shimadzu公司）、SCIEX Triple TOF 6600型质谱仪（美            白质，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液在
          国 Sciex 公司）、KQ5200DE 型数控超声波清洗器（昆山                   30 ℃下真空旋转蒸发干燥。将干燥后的残留物用 75%
          市超声仪器有限公司）、H2-16K 型台式高速离心机（湖                        乙腈 100 μL 溶解，滤过。将所得溶液储存于 4 ℃冰箱
          南可成仪器设备有限公司）、AL204型电子天平[梅特勒-                        中，用于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析，鉴定其入血成分。
          托利多仪器（上海）有限公司]。                                     2.5 实验数据处理过程
          1.2 主要药品与试剂                                             使用MS-DIAL4.60工作站采集数据，通过查阅与天
              天智颗粒（批号 191003，规格 5 g/袋）由仲景宛西制                  麻、钩藤、杜仲等中草药相关的文献和SciFinder（https：//
          药股份有限公司提供；甲醇和乙腈均为色谱纯，其他试                            scifinder. cas. org）、PubChem（https：//pubchem. ncbi. nlm.
          剂均为分析纯，水为纯化水。                                       nih.gov/）、MassBank（https：//mona.fiehnlab.ucdavis.edu/）、
          1.3 动物                                              TCMSP（https：//old. tcmsp-e. com/tcmsp. php）、TCMID
              SD雄性健康大鼠，体质量（210±10）g，由郑州市惠                    （http//www.megabionet.org/tcmid/）、TCM-ID（http//bidd.
          济区华兴实验动物养殖场提供，饲养于河南中医药大学                            nus.edu.sg/group/TCMsite/default.aspx）、TCM Data‐
          实验动物中心，实验动物生产许可证号为 SCXK（豫）                          base@Taiwan（http//tcm.cmu.edu.tw/）等数据库对化合物
          2019-0002。所有大鼠饲养于室温（24±2）℃、相对湿度                     的名称、分子量、物质数字识别号码（CAS号）、结构类型
         （55±15）%、12 h 黑暗/12 h 光照循环的环境中，正常饮                   等信息进行整理。将收集所得化合物的精确分子量与
          食、饮水。大鼠适应性喂养3 d后进行实验。                               理论分子量进行对比，并将分子质量误差在±10×10                     －6
          2 方法                                                以内的化合物作为推测的可能化合物。分析可能化合
          2.1 色谱条件和质谱条件                                       物的质谱信息，并进行归类；推测其裂解过程，并对主要
                                                              的离子碎片进行归属。通过对比空白血清（取自对照组
              色谱条件如下：色谱柱为 Agilent Eclipse Plus C18
         （4.6 mm×100 mm，1.8 μm）；流动相A为0.5%甲酸水溶                 大鼠）、给药血清（取自给药组大鼠）和天智颗粒提取液
          液，流动相 B 为乙腈，梯度洗脱（0～5 min，10%B；5～10                  的总离子流图以及主要离子碎片等相关信息对入血成
          min，10%B→90%B；10～25 min，90%B→98%B；25～30             分进行分析。


          · 2974 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24                            中国药房  2022年第33卷第24期
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