Page 33 - 《中国药房》2022年24期

A.正常组 B.模型组 C.阳性对照组 D.柠檬苦素高剂量组 E.柠檬苦素低剂量组
➡ ：胶原纤维
图2 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠肝纤维化变化的影响（Masson染色，×400）
3.4 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠肝组织中Akt、p-Akt、 具有价格低廉、可靠性高、重复性好、与人类肝纤维化病
E-cadherin、vimentin蛋白表达及p-Akt/Akt比值的影响 理相似性高等特点，已成为了应用最广泛的肝纤维化造
[11]
与正常组比较，模型组大鼠肝组织中Akt、p-Akt、vi‐ 模方法 。CCl4可造成肝细胞损害，引起肝细胞膜通透
mentin 蛋白表达水平及 p-Akt/Akt 比值均显著升高（P＜ 性增高，胞浆内的 ALT、AST 释放入血，使血液中 ALT、
0.01），E-cadherin 蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；与 AST含量升高，是判断肝细胞损伤与否及损伤程度的主
[12]
模型组比较，阳性对照组和柠檬苦素低、高剂量组大鼠 要指标 。HA、LN是参与细胞外基质合成的主要成分，
[13]
肝组织中 Akt、p-Akt、vimentin 蛋白表达水平及 p-Akt/ 可反映肝内纤维增生情况 。本研究结果显示，与正常
Akt 比值均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），阳性对照组 组比较，模型组大鼠血清中ALT、AST、HA、LN含量均显
和柠檬苦素高剂量组大鼠肝组织中E-cadherin蛋白表达 著升高，HE 及 Masson 染色均观察到大量纤维组织增
水平均显著升高（P＜0.01），柠檬苦素低剂量组大鼠肝 生，表明肝纤维化模型造模成功。与模型组比较，经柠
组织中E-cadherin蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞ 檬苦素干预后，大鼠血清中HA、LN（柠檬苦素低剂量组
0.05）。结果见图3。 除外）、AST、ALT 含量均显著降低，肝组织纤维增生程
0.8 Ⅰ 度均有所减轻，表明柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠的肝
Ⅱ
Ⅲ 损伤和肝纤维化有一定的改善作用。
0.6 a Ⅳ
Ⅴ
p-Akt 60 kDa 蛋白表达水平 0.4 b a EMT 是指上皮细胞在致病因子（如细胞生长因子、
Akt 56 kDa b b b b 缺氧、炎症等）刺激下丧失细胞极性，细胞间黏附力降
E-cadherin 120 kDa 0.2 b
vimentin 54 kDa 低，获得迁移的能力，变为具备间质细胞特征细胞的过
GAPDH 36 kDa 0 程 。E-cadherin 是黏附连接的关键成分，在维持细胞
[14]
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ p-Akt Akt
A.蛋白表达的电泳图 B. p-Akt和Akt蛋白表达水平 黏附和上皮表型中不可或缺，其表达下调会导致细胞间
0.8 a 0.8 Ⅰ 的黏附力降低，使细胞失去极性，是主要的上皮标志
a Ⅱ
[15]
Ⅲ 物 。vimentin 是间质细胞骨架的主要组成部分，也是
0.6 c c c 0.6 Ⅳ
Ⅴ
p-Akt/Akt 0.4 蛋白表达水平 0.4 b b c b c 主要的间充质标志物，正常上皮细胞中vimentin表达较
0.2 0.2 少，当发生EMT时上皮细胞角蛋白转化为以vimentin为
[16]
a 主的细胞骨架，具有间质细胞形态和游走能力 。Akt
0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ E-cadherin vimentin 磷 酸 化 可 调 控 细 胞 核 内 的 转 录 因 子 ，转 录 因 子 与
C. p-Akt/Akt比值 D. E-cadherin和vimentin蛋白表达水平 E-cadherin 结合，可导致 E-cadherin 表达下降，进而诱导
Ⅰ：正常组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：阳性对照组；Ⅳ：柠檬苦素高剂量组； EMT 发生 [17―18] 。本研究结果显示，与模型组比较，阳性
Ⅴ：柠檬苦素低剂量组；a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，
对照组和柠檬苦素低、高剂量组大鼠肝组织中 Akt、
P＜0.01；c：与模型组比较，P＜0.05
图3 柠檬苦素对肝纤维化模型大鼠肝组织中 p-Akt、 p-Akt、vimentin 蛋白表达水平及 p-Akt/Akt 比值均显著
Akt、E-cadherin、vimentin 蛋白表达及 p-Akt/Akt 降低，E-cadherin 蛋白表达水平（柠檬苦素低剂量组除
比值的影响（x±s，n＝3） 外）均显著升高，表明柠檬苦素能抑制Akt蛋白磷酸化，
逆转EMT进程。
4 讨论 综上所述，柠檬苦素能改善大鼠肝纤维化，作用机
柠檬苦素是一种天然化学物质，对急性肝损伤具有 制可能与其抑制Akt磷酸化及逆转EMT进程有关。
[8]
改善作用 ，同时也可通过减少脂质积累、抑制炎症和氧 参考文献
[9]
化应激来缓解非酒精性脂肪性肝病的发展 。本研究采 [ 1 ] XIE G， DIEHL A M. Evidence for and against epithelial-to-
用CCl4造模法构建肝纤维化大鼠模型，考察柠檬苦素对 mesenchymal transition in the liver[J]. Am J Physiol Ga-
大鼠肝纤维化的影响，同时选用有明显抗肝纤维化作用 strointest Liver Physiol， 2013， 305（12）： G881-G890.
的秋水仙碱作为阳性对照药物进行比较 。CCl4造模法 [ 2 ] YU K， LI Q， SHI G， et al. Involvement of epithelial-
[10]

中国药房 2022年第33卷第24期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 24 · 2971 ·